O principal motivo pelo qual você tinge uma amostra antes de colocá-la no microscópio é para ver melhor, mas a coloração faz muito mais do que simplesmente destacar os contornos das células. Algumas manchas podem penetrar nas paredes celulares e destacar componentes celulares, e isso pode ajudar os cientistas a visualizar os processos metabólicos. As manchas também ajudam a distinguir entre células vivas e mortas. Além disso, a coloração permite que os cientistas contem o número de células de um determinado tipo dentro de uma determinada biomassa. Existem vinte ou mais tipos diferentes de manchas, e cada uma tem sua finalidade.
TL; DR (muito longo; Não li)
O principal objetivo da coloração é destacar células e partes de células. Existem mais de 20 tipos diferentes de manchas, e o tipo de mancha que você usa depende do que você está procurando.
Tipos de manchas
A escolha da mancha depende do que você está procurando. Nem todas as manchas são adequadas para células vivas, mas aquelas que são incluem o marrom Bismarck, o vermelho de tolueno, o azul do Nilo e o vermelho do Nilo e certas fluorescentes usadas para destacar o DNA. Algumas manchas destacam esporos, algumas detectam lipídios e proteínas e algumas mudam de cor na presença de amidos. O objetivo do exame determina o melhor tipo de mancha a ser usado. Por exemplo, um médico realizando um esfregaço de PAP usaria Eosin Y. É um corante fluorescente ácido que fica vermelho quando entra em contato com os glóbulos vermelhos, citoplasma e membranas celulares. Também é usado para testar a medula sanguínea.
Em alguns casos, um investigador pode usar mais de uma coloração. Por exemplo, a hematoxilina é uma mancha que torna os núcleos das células azuis. Quando usado em conjunto com a eosina, que torna as outras partes da célula vermelhas ou rosa, fornece um contraste mais forte e torna os núcleos mais fáceis de diferenciar. Os esfregaços de PAP e as amostras de medula sanguínea são mais fáceis de examinar quando essas duas manchas são usadas juntas.
Coloração de Gram: Os funcionários do hospital usam a coloração de Gram para identificar bactérias nocivas. Na verdade, trata-se de uma série de corantes que têm diferentes efeitos em diferentes tipos de bactérias e fornecem aos médicos uma importante ferramenta de diagnóstico. A coloração de Gram é um processo de três partes. No primeiro, é adicionado o violeta de cristal de Hucker, que mancha todas as bactérias com uma cor violeta uniforme. No estágio seguinte, é adicionada uma coloração de iodo, que faz com que a cor adira às células Gram-positivas, que são principalmente Staphylococcus e Streptococcus. A mancha é removida, deixando as células Gram-positivas com uma cor violeta distinta; em seguida, um terceiro corante, Safranine O, é introduzido para aumentar o contraste entre as bactérias Gram-negativas e o resto do material na lâmina.
Procedimento de coloração
Ao preparar uma amostra em uma lâmina, você pode montá-la a seco ou úmida, pode cortá-la em uma seção fina ou untá-la. Ao usar uma mancha, o procedimento usual é montar a amostra úmida, o que significa colocar uma gota de água na lâmina, colocar a amostra na água e cobri-la com uma lamínula. Você então aplica a mancha em um canto da lâmina com um conta-gotas e permite que ela seja puxada em direção à amostra por ação capilar. Ajuda colocar uma toalha de papel no lado oposto da lâmina para atrair a água. Uma vez que a mancha se espalhou por toda a lâmina, a amostra está pronta para exame.