Væskekromatografi med høy ytelse er en teknikk for laboratorieanalyse av en blanding. Det er en effektiv type kromatografi som bruker høyt trykk, i stedet for bare tyngdekraften, for å drive en prøve av en blanding gjennom en kolonne. En prøve injiseres, og deretter hjelper en pumpe som inneholder store mengder trykk til å bevege prøven langs en pakket kolonne, der den skilles i individuelle komponenter. Denne separasjonen blir deretter analysert av en detektor for å gi resultater.
Injeksjonssted
For å bli injisert i en HPLC, må en prøve først oppløses i et polært flytende løsningsmiddel, fortrinnsvis en med kjente HPLC-spektre, slik at dens data kan skilles fra prøvene. Væskeoppløsningen som inneholder prøven plasseres i instrumentet og sendes inn i kolonnen. Den faktiske plasseringen av injeksjonsstedet avhenger av instrumentets merke. I de fleste tilfeller er injeksjonsprosessen automatisert, men i noen tilfeller må en laboratoriearbeider injisere prøven ved hjelp av en liten sprøytenål.
Pumpekomponent
Pumpekomponenten til HPLC-enheten er nødvendig fordi den gir trykket som driver prøven gjennom kolonnen. Pumpestyrken varierer, men en kraftig kan produsere et trykk på opptil 6000 psi, eller pund per kvadrattomme, som påføres etter at prøven er injisert. Dette gjør at prøven kan passere gjennom kolonnen raskere og mer effektivt enn om den skulle dryppe gjennom bare tyngdekraften.
Kolonnebeskrivelse
Den økte hastigheten til en prøve som passeres gjennom kolonnen av en pumpe, tillater bruk av en annen type kolonne enn de som brukes i enkel væskekromatografi. Pakningsmaterialet i kolonnen kan ha en mye mindre partikkelstørrelse, noe som øker overflatearealet og derfor hjelper interaksjoner av prøven med kolonnen. De fleste HPLC-kolonner fungerer gjennom polaritet. Prøven oppløses i et polært løsningsmiddel, og kolonnen består av stort sett ikke-polære hydrokarboner. De polare delene av prøvemolekylet passerer veldig raskt gjennom kolonnen fordi de primært samhandler med løsemiddel, mens prøvenes ikke-polare komponenter ligger i kolonnen og danner svake interaksjoner med kolonnen komponenter. Derfor kommer prøvekomponentene av kolonnen i rekkefølge fra mest polære til mest ikke-polare.
Detektorfunksjon
Detektorer varierer også avhengig av typen HPLC-instrument som brukes. Imidlertid fungerer de fleste på samme grunnleggende måte. En kilde til ultrafiolett lys skinner på de adskilte prøvekomponentene når de kommer ut av kolonnen. De fleste organiske forbindelser absorberer en viss mengde lys, så når de passerer den påførte lysstrålen, kan en detektor plukke opp hvor mye lys som absorberes. Detektoren registrerer også komponentenes oppbevaringstid basert på rekkefølgen de kommer ut av kolonnen. Denne produksjonen kan deretter analyseres basert på toppareal for å bestemme den eksakte arten av prøvenes komponenter.
