電気泳動における緩衝液の目的

生化学者や分子生物学者は、電気泳動を使用してタンパク質や核酸などの高分子を分離します。 これにより、科学者は複雑な混合物中の個々のタンパク質または核酸配列を分離および分析できます。 ラボでの電気泳動の典型的な例は、微生物群集で生成されたDNAフラグメントを分離するためにポリメラーゼ連鎖反応(PCR)を使用する微生物学者です。 目的に関係なく、電気泳動では常に緩衝液を使用する必要があります。

TL; DR(長すぎる; 読んでいない)

電気泳動は、タンパク質や核酸などの高分子をサイズ、電荷、その他の特性によって分離します。 電荷によって分離する電気泳動の場合、科学者はバッファーを使用してその電荷をゲルに伝達します。 バッファーはまた、ゲルを安定したpHに維持し、不安定なpHにさらされた場合にタンパク質または核酸に発生する可能性のある変化を最小限に抑えます。

電気泳動の原理。

電気泳動は、分子のサイズ、電荷、またはその他の特性に基づいて、勾配に沿って分子を分離します。 その勾配は、電場、または変性剤濃度勾配ゲル電気泳動(DGGE)の場合は、尿素とホルムアミドの混合物などの変性剤である可能性があります。 タンパク質は、負に帯電している場合はアノードに向かって移動し、正に帯電している場合はカソードに向かって移動します。 大きな分子は小さな分子よりもゆっくりと移動するため、科学者は移動距離を測定し、対数を使用してフラグメントのサイズを決定できます。

変性剤濃度勾配ゲル電気泳動

DGGEを使用すると、DNAは、その特定のDNAフラグメントを完全に変性または展開するのに十分なパワーになるまで、変性パワーの増加の勾配に沿って移動します。 この時点で、移行は停止します。 科学者はこの方法を使用して、変性に対する個々の感受性に基づいてフラグメントを分離できます。

バッファの機能

電荷に基づいて分離する電気泳動の場合、緩衝液中のイオンは分離に必要な電荷を伝達します。 緩衝液は、弱酸と弱塩基の貯蔵所を提供することにより、pHを狭い範囲内に保ちます。 タンパク質または核酸の構造と電荷は、大幅なpH変化にさらされると変化し、適切な分離が妨げられるため、これは重要です。

典型的なバッファ

電気泳動ゲルをさまざまな望ましいpH範囲に維持するには、さまざまなバッファーが理想的です。 科学者がこの目的で使用する典型的な緩衝液には、酢酸、ホウ酸、リン酸、クエン酸、およびグリシンとタウリンが含まれます。 一般に、pKa値(酸解離定数)は必要なpHに近い必要があります。 電流を流しすぎないように、電荷の大きさが小さいバッファが望ましいです。

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