La principale raison pour laquelle vous colorez un échantillon avant de le mettre au microscope est de mieux l'observer, mais la coloration fait bien plus que simplement mettre en évidence les contours des cellules. Certaines taches peuvent pénétrer les parois cellulaires et mettre en évidence les composants cellulaires, ce qui peut aider les scientifiques à visualiser les processus métaboliques. Les taches aident également à distinguer les cellules vivantes des cellules mortes. De plus, la coloration permet aux scientifiques de compter le nombre de cellules d'un type particulier dans une certaine biomasse. Il existe une vingtaine ou plus de types de taches différents, et chacun a son utilité.
TL; DR (trop long; n'a pas lu)
Le but principal de la coloration est de mettre en évidence des cellules et des parties de cellules. Il existe plus de 20 types de teintures différentes, et le type de teinture que vous utilisez dépend de ce que vous recherchez.
Types de taches
Le choix de la teinture dépend de ce que vous recherchez. Tous les colorants ne conviennent pas aux cellules vivantes, mais ceux qui le sont incluent le brun Bismarck, le rouge toluène, le bleu du Nil et le rouge du Nil, et certains fluorescents utilisés pour mettre en évidence l'ADN. Certaines taches mettent en évidence les spores, certaines détectent les lipides et les protéines, et certaines changent de couleur en présence d'amidons. Le but de l'examen détermine le meilleur type de teinture à utiliser. Par exemple, un médecin effectuant un frottis PAP utiliserait l'éosine Y. C'est un colorant fluorescent acide qui devient rouge lorsqu'il entre en contact avec les globules rouges, le cytoplasme et les membranes cellulaires. Il est également utilisé pour tester la moelle sanguine.
Dans certains cas, un enquêteur peut utiliser plus d'une coloration. Par exemple, l'hématoxyline est un colorant qui bleuit les noyaux cellulaires. Lorsqu'il est utilisé en conjonction avec l'éosine, qui rend les autres parties de la cellule rouges ou roses, il offre un contraste plus fort et rend les noyaux plus faciles à différencier. Les frottis PAP et les échantillons de moelle sanguine sont plus faciles à examiner lorsque ces deux colorations sont utilisées ensemble.
La tache de Gram : Le personnel hospitalier utilise la coloration de Gram pour identifier les bactéries nocives. Il s'agit en fait d'une série de colorants qui ont des effets différents sur différents types de bactéries et donnent aux médecins un outil de diagnostic important. La coloration de Gram est un processus en trois parties. Dans le premier, le cristal violet de Hucker est ajouté, qui colore toutes les bactéries d'une couleur violette uniforme. À l'étape suivante, un colorant à l'iode est ajouté, ce qui fait adhérer la couleur aux cellules Gram-positives, qui sont principalement des staphylocoques et des streptocoques. La tache est lavée, laissant les cellules Gram-positives avec une couleur violette distincte; puis une troisième coloration, la Safranine O, est introduite pour renforcer le contraste entre les bactéries Gram-négatives et le reste du matériel de la lame.
Procédure de coloration
Lors de la préparation d'un échantillon sur une lame, vous pouvez le monter à sec ou humide, vous pouvez le couper en une section mince ou vous pouvez l'étaler. Lors de l'utilisation d'un colorant, la procédure habituelle consiste à monter l'échantillon à l'eau, c'est-à-dire à placer une goutte d'eau sur la lame, à placer l'échantillon dans l'eau et à le recouvrir d'une lamelle. Vous appliquez ensuite la teinture sur un coin de la lame avec un compte-gouttes et laissez-la être attirée vers l'échantillon par capillarité. Il est utile de mettre une serviette en papier sur le côté opposé du toboggan pour attirer l'eau. Une fois que la tache s'est étendue sur toute la lame, l'échantillon est prêt à être examiné.
