Calculer le titre d'un virus est une manière compliquée de dire qu'un scientifique compte le nombre de virus dans un échantillon particulier. Pour calculer les titres viraux, les scientifiques infectent des plaques de bactéries en croissance avec des solutions virales à différentes concentrations et déterminer le nombre de virus dans la solution d'origine en comptant les bactéries qui sont mortes à cause du virus infection.
Mettez des gants, remplissez 10 tubes de culture avec 9 ml de bouillon et étiquetez-les "10^-1", "10^-2", "10^-3", et ainsi de suite jusqu'à "10^-10". Ces tubes seront utilisés pour les dilutions virales en série utilisées pour calculer le phage titre. Étant donné que les virus peuvent atteindre des concentrations incroyablement élevées, vous devez les diluer afin de les compter efficacement. Chaque tube représente une dilution au dixième du virus.
Prenez 1 ml de la culture mélangée de votre tube étiqueté "10^-1" et transférez-le avec une nouvelle pipette dans le tube suivant, étiqueté "10^-2". Mélangez également ce tube.
Continuez ce schéma pour créer une série de dilutions en série. Vous vous retrouverez avec 9 tubes de 9 ml et 1 tube de 10 ml. Les charges virales dans vos tubes seront diluées de 10 fois (votre premier tube) ou 100 fois (votre deuxième tube) à dix milliards de fois (votre dernier tube).
Ajoutez deux gouttes de culture bactérienne à votre gélose et mélangez doucement. Ce sont les bactéries qui seront tuées, ce qui vous permet de compter le nombre de particules virales dans une solution particulière.
Ajouter 1 ml de chaque dilution en série à son tube de gélose correspondant pendant que les tubes sont encore dans le bain d'eau chaude. Par exemple, 1 ml de votre dilution en série 10^-1 doit aller dans le tube de gélose étiqueté « 10^-1 ».
Mélanger chaque tube puis verser chaque tube dans la plaque de Pétri avec l'étiquette correspondante. Cela créera une fine couche de gélose qui a été inoculée avec des bactéries et des virus dans chaque plaque. Laissez les plaques pousser pendant la nuit dans un incubateur.
Sortez vos plaques de l'incubateur et examinez-les. Vous devriez voir des zones nuageuses dans toute la plaque où les bactéries se sont développées, à l'exception de petites taches claires appelées plaques. Ces plaques sont des plaques de bactéries mortes, et chaque plaque représente un virus.
Prenez le nombre de plaques dans votre assiette et multipliez par 10. Si vous comptiez 157 plaques, vous obtiendriez 1570.
Multipliez le nombre que vous avez obtenu à l'étape précédente par l'inverse du nombre sur votre tube de dilution. Par exemple, si la plaque que vous avez sélectionnée était la plaque 10^-5, vous multiplieriez 1570 par 10^5 pour obtenir 157000000. Ce nombre final est votre titre de phage et représente le nombre de virus par ml de votre culture d'origine.