La electroforesis en gel es un método utilizado en los laboratorios para separar ADN (ácido desoxirribonucleico). También se puede utilizar para separar ARN y proteínas.
La lectura de los resultados de la electroforesis en gel permite a los investigadores determinar el tamaño de las hebras en una muestra. Para comprender cómo funciona el proceso, primero se debe aprender la definición de electroforesis en gel.
Definición de electroforesis en gel
La electroforesis en gel es una herramienta poderosa utilizada en Biología Molecular para determinar el tamaño y la carga eléctrica de ADN, ARN y proteínas. Empiece utilizando fragmentos de ADN que fueron digeridos por enzimas de una hebra más grande de ADN.
Usando la intensidad de la banda de electroforesis en gel como sus resultados, puede averiguar cuál es el tamaño de los fragmentos. Entonces uno puede obtener un Huella dactilar de ADN.
Como revela la parte "electro" de la palabra, un definición de electroforesis en gel implica el uso de un campo eléctrico. Se utiliza una máquina especial que contiene una solución tampón que cubre los electrodos, un pozo para que el gel se suspenda en el interior y los propios electrodos.
El gel en electroforesis en gel
Electroforesis en gel requiere el uso de un gel formado en una losa típicamente hecha de una versión purificada de agar de algas marinas llamado agarosa.
Geles de agarosa hacen una matriz porosa a través de la cual las moléculas cargadas de varios tamaños pueden viajar a diferentes velocidades. Se agrega una sustancia química llamada bromuro de etidio (EtBr) a la solución de gel antes de verterla en un molde.
Si tiene moléculas de proteína o ADN muy pequeñas para separar, es posible que deba usar un gel de poliacrilamida en lugar de agarosa. Tenga cuidado cuando use poliacrilamida, ya que es neurotóxica.
Se coloca un peine especial en el molde de gel de agarosa y luego se retira con cuidado una vez que se solidifica. Aquí es donde se coloca el fragmento de ADN u otras muestras moleculares, que primero se mezclaron con un colorante de carga especial. La carga de tinte es solo para rastrear el movimiento del ADN, ya que no es visible de otra manera.
También hay un pozo que contiene lo que se llama un Escalera de ADN o marcador. Esto sirve como una plantilla de alta calidad con tamaños de banda conocidos, para comparar el tamaño con las muestras de ADN que se están estudiando. Una vez que se aplica el campo eléctrico, estas moléculas cargadas negativamente viajarán a través del gel hacia el extremo positivo.
Resultados de la electroforesis en gel
Una vez que las moléculas han viajado hasta el final del gel, es hora de leer resultados de la electroforesis en gel. El tinte EtBr en el gel se une al ADN fácilmente, de ahí su uso, y luego se pueden ver bandas de ADN fluorescentes bajo luz ultravioleta.
Debe tener mucho cuidado de no tocar el bromuro de etidio, ya que su afinidad por el ADN también significa que puede desenrollarlo; por tanto, se considera un mutágeno. Ahora se encuentran disponibles tintes más nuevos y seguros, aunque sus precios son más altos.
La luz ultravioleta revela la intensidad de la banda de electroforesis en gel del ADN u otras muestras moleculares. La ubicación de las bandas en un gel revela el tamaño de la Fragmento de ADN. La intensidad de la banda de electroforesis en gel revela la concentración de la molécula.
Ahora puede comparar las bandas de ADN de sus muestras con la muestra de la escalera de ADN. Los tamaños de banda conocidos de la escalera le ayudarán a determinar el tamaño relativo del ADN que está estudiando.
La importancia de la electroforesis en gel de calidad
La electroforesis en gel se ha utilizado en Huellas dactilares de ADN y análisis forense. Ha ayudado a los investigadores a determinar información sobre los genomas de muchas especies. El uso de resultados de electroforesis en gel de alta calidad es esencial para estos campos importantes.
Por lo tanto, es fundamental trabajar con ingredientes de alta calidad y tener mucho cuidado al hacer geles. Es fundamental prevenir la contaminación de las muestras de ADN con ARN o proteínas.
Asegúrese de usar tampón limpio, vierta el gel con cuidado para que los pocillos del peine se formen uniformemente y mantenga todos los reactivos a la temperatura adecuada. Electroforesis en gel La intensidad de la banda debe ser vibrante y limpia, sin rastros de otro ADN en el fondo y sin manchas de ARN o proteínas que contaminen el gel.