La electroforesis en gel es uno de los principales métodos utilizados en biología molecular para el análisis de ADN. Este método implica la migración de fragmentos de ADN a través de un gel, donde se separan según su tamaño o forma. Sin embargo, incluso un método científicamente sólido como la electroforesis en gel no es inmune a los errores.
Cómo funciona la electroforesis
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La electroforesis en gel implica el uso de un gel generalmente hecho de polímeros como la agarosa. El gel se sumerge en una solución tampón que conduce un campo eléctrico. La muestra de ADN de interés se fragmenta primero usando enzimas de restricción y luego se inyecta en el gel. Cuando se enciende el campo eléctrico, los fragmentos de ADN en el gel migran hacia el electrodo positivo. Si los fragmentos de ADN son de diferentes tamaños, los tiempos de migración serán diferentes para cada fragmento de tamaño. Luego, los fragmentos se visualizan usando un tinte o autorradiografía y son visibles como bandas en el gel.
Contaminación de la muestra
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La principal aplicación de la electroforesis es como herramienta para el análisis de ADN en biología molecular, pero también se utiliza en medicina forense como medio para identificar muestras de la escena de un crimen. Es importante minimizar las fuentes de errores en esta técnica para obtener resultados precisos. Una fuente de error es la contaminación de la muestra de ADN. Si hay ADN extraño en la muestra, el gel tendrá más bandas de las que se encontrarían en un gel que solo contiene la muestra purificada.
Problemas con el gel, la corriente y el tampón
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La concentración del gel también debe ser correcta para evitar errores. Si la concentración es demasiado alta o demasiado baja, los fragmentos migrarán demasiado lento o demasiado rápido. Esto dará lugar a errores en la resolución de las distintas bandas. Durante la ejecución de la electroforesis, se debe tener cuidado para asegurarse de que el voltaje sea estable. Cualquier fluctuación en el voltaje dará como resultado una migración inestable de fragmentos de ADN, lo que provocará errores en la lectura de las bandas. La solución tampón también debe tener la composición correcta, ya que un tampón con un pH o concentración iónica incorrectos cambiará la forma de los fragmentos de ADN, cambiando también sus tiempos de migración.
Visualización adecuada
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Lo más importante es que el gel debe visualizarse correctamente. Si la concentración del tinte o la sonda radiactiva utilizada para visualizar las muestras es demasiado alta, la imagen resultante será muy desordenada, ya que también se visualizarán fragmentos residuales. Si la concentración de gel es demasiado baja, no habrá visualización. Cuando se han seguido los procesos correctos durante todas las etapas, la electroforesis en gel producirá resultados que son precisos y se pueden utilizar con gran confianza. Al igual que con todos los procedimientos científicos, la electroforesis en gel puede ser propensa a errores, pero estos pueden minimizarse con una preparación y manipulación adecuadas.