Extracción de ADN por método de spooling

ADN

Ácido desoxirribonucleico y proteínas. El ADN está organizado en unidades llamadas genes, cada uno de los cuales codifica una secuencia de ARN o proteína particular. Los genes se estudian para aprender sobre la estructura y función biológica, la evolución, las enfermedades y muchos otros aspectos de los sistemas vivos. Para estudiar los genes en detalle, el ADN debe aislarse y purificarse de las células de interés.

Extracción de ADN

Aunque el ADN de una sola célula se puede extraer y estudiar, no es suficiente verlo a simple vista. Para obtener una cantidad suficiente para poner en cola, cuantas más células tenga que trabajar, mejor (muchos millones).

Los protocolos exactos varían considerablemente para tener en cuenta las características únicas de muestras específicas, pero los pasos generales son homogeneización, lisis, digestión, separación y recolección. El procedimiento se lleva a cabo mejor en un tubo pequeño de vidrio o plástico (dependiendo del tamaño de la muestra).

Generalmente, una muestra se mezcla o se muele para separar completamente las células entre sí. Esto hace que los ingredientes de las células sean más accesibles para los reactivos que siguen. Luego se agregan detergente o enzimas al homogeneizado para lisar las membranas celulares (y las membranas nucleares si las células son eucariotas) para liberar el ADN. En este punto, el ADN está rodeado de proteínas, lípidos, carbohidratos, todo lo demás que estaba contenido en las células.

instagram story viewer

Puede ser necesaria una digestión enzimática adicional para descomponer las proteínas para que no se unan al ADN e interfieran con su recolección. El ADN se separa del resto del contenido celular mediante la adición de alcohol etílico o isopropílico frío, puro. El ADN no es soluble en estos alcoholes, por lo que se condensará para intentar minimizar su contacto con el alcohol. A continuación, se recogen los ADN condensados, normalmente mediante centrifugación o enrollado.

Cola de ADN

La recolección de ADN por spooling es eficaz cuando se obtiene una gran cantidad de ADN a partir de un procedimiento de extracción. También es un excelente método de demostración, ya que es claramente visible una impresionante maraña de ADN puro.

Para enrollar el ADN, el paso de separación debe realizarse con cuidado. Si no formaba parte de la mezcla de reactivo de lisis previamente agregada, se debe agregar una solución de sal concentrada (cloruro de sodio) a la solución antes del paso de adición de alcohol. El alcohol frío se vierte lentamente por el costado del tubo de ensayo para formar una capa encima de la solución acuosa, evitando que se mezcle. Si se hace correctamente, el alcohol formará su propia capa sobre la capa salada. Luego viene el spooling.

Para recolectar el ADN de la capa salada, coloque con cuidado una varilla de vidrio a través de la capa de alcohol hasta que toque el fondo del tubo. Gire lentamente la varilla entre los dedos, mientras observa la interfaz entre las dos capas. Si hay suficiente ADN presente, se agrupará en la interfaz entre las capas para formar una masa translúcida lechosa. Gire la varilla para envolver el ADN a su alrededor (que es la parte del carrete) y extráigala del tubo. El ADN se puede transferir a otro tubo de alcohol puro para su almacenamiento o análisis adicional.

Teachs.ru
  • Cuota
instagram viewer