En la electroforesis en gel, las muestras de ADN o proteínas se separan, generalmente en función del tamaño, mediante la aplicación de un campo eléctrico que las hace migrar a través de un gel. El uso de electroforesis en gel es una rutina en los laboratorios de investigación biomédica y se utiliza para responder a una variedad de preguntas diferentes, por lo que no existe una forma universal de analizar los resultados.
Diferentes técnicas como Western Blot, Northern Blot y Southern Blot, por ejemplo, implican electroforesis en gel.
Si estas haciendo Gel de agarosa electroforesis de muestras de ADN, el tipo de procedimiento más común, por lo general deberá hacer al menos dos cosas: 1) distinguir sin cortar plásmidos de inserciones, plásmidos mellados y plásmidos cortados y, 2) estimar el tamaño de los diversos fragmentos de ADN con una curva estándar Excel o calculadora.
Consulte su cuaderno de laboratorio para determinar qué muestras se cargaron en qué carriles. Cuando cargó los pocillos para su gel, debería haber anotado la identidad de cada carril / muestra.
Con una regla, mida la distancia en su imagen desde los pozos hasta el tinte de seguimiento, que han viajado más lejos que cualquiera de las bandas de ADN (en otras palabras, estará en la parte inferior de la gel). Registre este número: las unidades que usa no son importantes.
Mida la distancia en su imagen desde los pozos hasta cada una de las bandas en la "escalera", luego divida esa distancia por la distancia recorrida por el tinte de seguimiento banda. Este cálculo le da la movilidad relativa de cada banda.
Ejemplo: Suponga que la banda de tinte de seguimiento viajó 6 pulgadas y tenemos tres bandas que viajaron 5, 4.5 y 3.5 pulgadas.
¿Cuál es su movilidad relativa? Respuesta: Dividimos 5, 4.5 y 3.5 por 6 para obtener movilidades relativas de 0.833, 0.75 y 0.5833.
El fabricante le da el tamaño de cada fragmento en las escaleras que suministra, por lo que ya debería tener esta información.
Utilice la función Trendline en su programa de hoja de cálculo para ajustar una ecuación a los datos. Esta ecuación debe ser una ecuación de potencia (por ejemplo, x ^ -2) y debe ajustarse relativamente bien a los datos (coeficiente R de al menos 0,9). Esto crea una curva y una curva estándar. Sobresalir.
Recuerde que los fragmentos de ADN más pequeños viajan más lejos a través del gel que los fragmentos de ADN grandes, por lo que los más cercanos al tinte de seguimiento serán los más pequeños. Tenga en cuenta, sin embargo, que si plásmido (circular) el ADN no está cortado, se volverá "superenrollado" o retorcido como un cable telefónico, lo que en realidad lo hará viajar más lejos que el ADN lineal del mismo tamaño.
Del mismo modo, un plásmido "mellado" que se ha cortado de forma incompleta viajará un más corta distancia que el ADN lineal del mismo tamaño. En consecuencia, no puede estimar el tamaño de los plásmidos sin cortar de su gel.
Haga coincidir las bandas en cada carril con la identidad de la muestra que cargó en ese carril y determine si lo que ve es lo que hubiera esperado. Esto dependerá de la naturaleza de su experimento.
Sin embargo, en general, si digeriera un plásmido de inserción con dos enzimas de restricción, esperaría que la inserción se liberara del plásmido.
Dado que es mucho más pequeño que el plásmido, esperaría ver dos bandas en ese carril, una cerca de la parte superior y la otra hacia abajo cerca de la parte inferior. Un plásmido cortado con solo una enzima de restricción debe formar solo una banda que viaja un poco más lejos que el plásmido cortado con dos enzimas de restricción, pero no tan lejos como el inserto.
Mida la distancia desde los pozos hasta el plásmido cortado e inserte bandas con su regla. Divida estos números por la distancia recorrida por el tinte de seguimiento para encontrar la movilidad relativa de las inserciones y los plásmidos cortados.