Η ηλεκτροφόρηση γέλης είναι μια μέθοδος που χρησιμοποιείται στα εργαστήρια για τον διαχωρισμό DNA (δεοξυριβονουκλεϊκό οξύ). Μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για το διαχωρισμό RNA και πρωτεϊνών.
Η ανάγνωση των αποτελεσμάτων ηλεκτροφόρησης γέλης επιτρέπει στους ερευνητές να προσδιορίσουν το μέγεθος των κλώνων σε ένα δείγμα. Για να καταλάβουμε πώς λειτουργεί η διαδικασία, πρέπει πρώτα να μάθουμε τον ορισμό της ηλεκτροφόρησης γέλης.
Ορισμός Ηλεκτροφόρησης Gel
Η ηλεκτροφόρηση γέλης είναι ένα ισχυρό εργαλείο που χρησιμοποιείται στο ΜΟΡΙΑΚΗ ΒΙΟΛΟΓΙΑ για τον προσδιορισμό του μεγέθους και του ηλεκτρικού φορτίου των DNA, RNA και πρωτεϊνών. Ξεκινάτε χρησιμοποιώντας κομμάτια DNA που αφομοιώθηκαν από ένζυμα από ένα μεγαλύτερο σκέλος DNA.
Χρησιμοποιώντας την ένταση της ζώνης ηλεκτροφόρησης σε πήκτωμα ως αποτέλεσμα, μπορείτε να καταλάβετε ποιο είναι το μέγεθος των θραυσμάτων. Κάποιος μπορεί στη συνέχεια να αποκτήσει ένα Δακτυλικό αποτύπωμα DNA.
Όπως αποκαλύπτει το «ηλεκτρο» τμήμα της λέξης, α ορισμός ηλεκτροφόρησης γέλης
συνεπάγεται τη χρήση ηλεκτρικού πεδίου. Χρησιμοποιείται ένα ειδικό μηχάνημα που περιέχει ένα ρυθμιστικό διάλυμα που καλύπτει τα ηλεκτρόδια, ένα πηγάδι για το τζελ να αιωρείται στο εσωτερικό και τα ίδια τα ηλεκτρόδια.Το Gel σε ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα
Ηλεκτροφόρηση γέλης απαιτεί τη χρήση μιας γέλης που σχηματίζεται σε μια πλάκα που συνήθως κατασκευάζεται από μια καθαρισμένη εκδοχή άγαρ από φύκια που ονομάζονται αγαρόζη.
Ζελέ αγαρόζης φτιάξτε μια πορώδη μήτρα μέσω της οποίας φορτισμένα μόρια διαφόρων μεγεθών μπορούν να ταξιδέψουν με διαφορετικές ταχύτητες. Μία χημική ουσία που ονομάζεται βρωμιούχο αιθίδιο (EtBr) προστίθεται στο διάλυμα πηκτής πριν από την έκχυση σε καλούπι.
Εάν έχετε πολύ μικρά μόρια DNA ή πρωτεΐνης για διαχωρισμό, ίσως χρειαστεί να χρησιμοποιήσετε ένα γέλη πολυακρυλαμιδίου αντί για αγαρόζη. Προσέξτε όταν χρησιμοποιείτε πολυακρυλαμίδιο, γιατί είναι νευροτοξικό.
Μια ειδική χτένα τοποθετείται στο καλούπι αγαρόζης και στη συνέχεια αφαιρείται προσεκτικά αφού στερεοποιηθεί. Εδώ τοποθετούνται το θραύσμα DNA ή άλλα μοριακά δείγματα, αφού πρώτα αναμίχθηκαν με μια ειδική βαφή φόρτωσης. ο φόρτωση βαφής είναι απλώς να παρακολουθείτε την κίνηση του DNA, καθώς δεν είναι ορατό διαφορετικά.
Υπάρχει επίσης ένα πηγάδι που περιέχει αυτό που ονομάζεται α Σκάλα DNA ή δείκτη. Αυτό χρησιμεύει ως πρότυπο υψηλής ποιότητας με γνωστά μεγέθη ζώνης, για σύγκριση μεγέθους με τα δείγματα DNA που μελετώνται. Μόλις εφαρμοστεί το ηλεκτρικό πεδίο, αυτά τα αρνητικά φορτισμένα μόρια θα ταξιδέψουν μέσω της γέλης προς το θετικό άκρο.
Αποτελέσματα ηλεκτροφόρησης πηκτής
Μόλις τα μόρια έχουν ταξιδέψει στο τέλος της γέλης, είναι καιρός για ανάγνωση αποτελέσματα ηλεκτροφόρησης γέλης. Η χρωστική EtBr στο πήκτωμα συνδέεται εύκολα με το DNA, εξ ου και η χρήση της, και στη συνέχεια μπορείτε να δείτε ζώνες DNA φθορισμού κάτω από το υπεριώδες φως.
Πρέπει να προσέχετε πολύ να μην αγγίζετε το βρωμιούχο αιθίδιο, γιατί η συγγένεια του με το DNA σημαίνει επίσης ότι μπορεί να το χαλαρώσει. Ως εκ τούτου θεωρείται μεταλλαξιογόνο. Είναι πλέον διαθέσιμες νεότερες, ασφαλέστερες βαφές, αν και οι τιμές τους είναι υψηλότερες.
Το υπεριώδες φως αποκαλύπτει την ένταση ζώνης ηλεκτροφόρησης γέλης του DNA ή άλλων μοριακών δειγμάτων. Η θέση των ζωνών σε ένα τζελ αποκαλύπτει το μέγεθος του Θραύσμα DNA. ο ένταση ζώνης ηλεκτροφόρησης πηκτής αποκαλύπτει τη συγκέντρωση του μορίου.
Τώρα μπορείτε να συγκρίνετε τις ζώνες του DNA στα δείγματά σας με το δείγμα σκάλας DNA. Τα γνωστά μεγέθη ζώνης της σκάλας θα σας βοηθήσουν να προσδιορίσετε το σχετικό μέγεθος του DNA που μελετάτε.
Η σημασία της ηλεκτροφόρησης γέλης ποιότητας
Η ηλεκτροφόρηση πηκτής έχει χρησιμοποιηθεί στο Δακτυλικό αποτύπωμα DNA και εγκληματολογία. Έχει βοηθήσει τους ερευνητές να καθορίσουν πληροφορίες σχετικά με τα γονιδιώματα πολλών ειδών. Η χρήση υψηλής ποιότητας ηλεκτροφόρησης πηκτωμάτων είναι απαραίτητη για αυτά τα σημαντικά πεδία.
Είναι επομένως ζωτικής σημασίας να εργαστείτε με συστατικά υψηλής ποιότητας και να προσέχετε πολύ στην κατασκευή πηκτωμάτων. Είναι απαραίτητο να αποφευχθεί η μόλυνση των δειγμάτων DNA με RNA ή πρωτεΐνες.
Φροντίστε να χρησιμοποιήσετε καθαρό ρυθμιστικό διάλυμα, ρίξτε προσεκτικά το τζελ έτσι ώστε τα φρεάτια χτένας να είναι ομοιόμορφα σχηματισμένα και να διατηρήσετε όλα τα αντιδραστήρια στη σωστή θερμοκρασία. Ηλεκτροφόρηση γέλης Η ένταση της ζώνης πρέπει να είναι ζωντανή και καθαρή, χωρίς ίχνη άλλου DNA στο παρασκήνιο και χωρίς επιχρίσματα RNA ή πρωτεϊνών που μολύνουν το πήκτωμα.