ทริสหรือทริส (ไฮดรอกซีเมทิล) อะมิโนมีเทนเป็นบัฟเฟอร์ทางชีวภาพทั่วไป ซึ่งใช้ตลอดกระบวนการสกัดดีเอ็นเอ ในระหว่างการสกัดจากแหล่งใดๆ ก็ตาม DNA จะไวต่อค่า pH ในระหว่างการสลายเซลล์ การกำจัดส่วนประกอบของเซลล์ที่ไม่ต้องการและการตกตะกอน ทริสจะใช้เพื่อรักษาค่า pH ให้คงที่ นอกจากนี้ยังมีบทบาทสำคัญในการสลายเซลล์
ทีแอล; DR (ยาวเกินไป; ไม่ได้อ่าน)
การสกัดดีเอ็นเอเป็นกระบวนการที่ไวต่อค่า pH และการใช้บัฟเฟอร์ทริสช่วยรักษาค่า pH ให้คงที่เหนือการสลายและการสกัดเซลล์
Tris เป็นบัฟเฟอร์
เนื่องจากค่า pH สามารถมีอิทธิพลและได้รับอิทธิพลจากปัจจัยของเซลล์จำนวนหนึ่ง การรักษาค่า pH ให้คงที่จึงเป็นสิ่งสำคัญสำหรับวิทยาศาสตร์เชิงทดลอง บัฟเฟอร์ชีวภาพ เช่น ทริส มีความสำคัญเนื่องจากสามารถรักษาค่า pH ให้คงที่ได้ แม้จะมีอิทธิพลที่อาจทำให้ค่า pH เปลี่ยนไป ทริส (ไฮดรอกซีเมทิล) อะมิโนมีเทนที่มีค่า pKa เท่ากับ 8.1 เป็นบัฟเฟอร์ที่มีประสิทธิภาพระหว่าง pH 7 และ 9 เนื่องจากช่วงที่เป็นกลาง ทริสจึงเป็นบัฟเฟอร์ที่ใช้กันทั่วไปในห้องปฏิบัติการทางชีววิทยา อย่างไรก็ตาม ทริสบัฟเฟอร์มีความไวต่ออุณหภูมิ และควรใช้ที่อุณหภูมิซึ่งเดิมเป็น pH เพื่อหลีกเลี่ยงความไม่ถูกต้อง
การสลายของเซลล์
การสลายหรือการแตกเปิดเซลล์เป็นขั้นตอนแรกของการสกัดดีเอ็นเอ ทำได้โดยบัฟเฟอร์ที่มีทริสและ EDTA (กรดเอธิลีนไดเอมีนเตตระอะซิติก) EDTA จับกับไอออนบวกสองส่วน เช่น แคลเซียมและแมกนีเซียม เนื่องจากอิออนเหล่านี้ช่วยรักษาความสมบูรณ์ของเยื่อหุ้มเซลล์ การกำจัดพวกมันด้วย EDTA จะทำให้เมมเบรนไม่เสถียร Tris เป็นส่วนประกอบหลักในการบัฟเฟอร์ บทบาทหลักคือการรักษา pH ของบัฟเฟอร์ไว้ที่จุดคงที่ โดยปกติคือ 8.0 นอกจากนี้ tris มีแนวโน้มที่จะทำปฏิกิริยากับ LPS (ไลโปโพลีแซคคาไรด์) ในเมมเบรน ซึ่งทำหน้าที่ทำให้เมมเบรนไม่เสถียร เพิ่มเติม
Tris ปกป้อง DNA จากการเปลี่ยนแปลงค่า pH
เมื่อเซลล์แตกออกจากกัน DNA และเนื้อหาจะรั่วไหลเข้าไปในบัฟเฟอร์ นอกจากนี้ RNase A (ทำลาย RNA) โปรตีเอส (ทำลายโปรตีน) และ SDS (โซเดียม dodecyl sulfate ละลายเศษเมมเบรน) มักจะรวมอยู่ด้วย เมื่อนำมารวมกัน ซุปที่มีเนื้อหาในเซลล์และอาร์เอ็นเอและโปรตีนที่กระจัดกระจายอาจมีผลกระทบอย่างมากต่อ pH ของสารละลาย เนื่องจาก DNA มีความไวต่อ pH จึงเป็นสิ่งสำคัญสำหรับทริสในการบัฟเฟอร์ซุปและรักษา pH ไว้ที่จุดคงที่
การตกตะกอนของดีเอ็นเอ
ในขั้นตอนสุดท้ายของการสกัด DNA ตัว DNA เองจะถูกสกัดจากสารละลาย ณ จุดนี้ DNA จะละลายได้ในบัฟเฟอร์ ในการสกัดจากสารละลาย ดีเอ็นเอถูกทำให้ไม่ละลายโดยเติมเอธานอลหรือไอโซโพรพานอล (ไอโซโพรพิลแอลกอฮอล์) เมื่อทำเสร็จแล้ว DNA จะมองเห็นได้ชัดเจนในสารละลายในรูปของสารเส้นสีขาว แม้ว่า DNA อาจถูกแยกออกจากส่วนประกอบเซลล์ที่เหลืออยู่ในลักษณะนี้ แต่ก็ไม่ "ใช้ได้" เมื่อไม่ละลายน้ำ หลังจากแยกออกแล้ว แอลกอฮอล์จะถูกลบออก และ DNA จะต้องถูกส่งคืนไปยังบัฟเฟอร์ทางชีวภาพ เช่น ทริส เพื่อนำมาใช้
ทำด้วยตัวคุณเอง
แม้ว่าการสกัด DNA จะทำกันโดยทั่วไปในห้องปฏิบัติการวิจัยโดยทั่วไปโดยใช้วิธีใดวิธีหนึ่งดังต่อไปนี้ ชุดอุปกรณ์ที่มีจำหน่ายในท้องตลาด ใครๆ ก็ทำการสกัด DNA ได้ที่บ้านโดยใช้ของใช้ในครัวเรือนทั่วไปและสีเขียว ถั่วหรือผักโขม ในกรณีนี้ ไม่มีทริสหรือบัฟเฟอร์ทางชีวภาพใดๆ เพื่อปกป้อง DNA จากการเปลี่ยนแปลงของค่า pH อย่างไรก็ตาม เป็นภาพที่ช่วยให้นักเรียนเชื่อมต่อกับ DNA ของเซลล์ได้