วาดแผนภูมิความเข้มข้นของผลิตภัณฑ์เทียบกับเวลาสำหรับข้อมูลจากหลอดทดลองแรกของการสอบวิเคราะห์ด้วยเอนไซม์ หมายเหตุ: แกนนอนควรเป็น "เวลา" และแกนตั้งควรเป็น "ความเข้มข้นของผลิตภัณฑ์"
คำนวณเส้นถดถอยเชิงเส้นสำหรับจุดข้อมูลที่คุณวางแผนไว้ในส่วนที่ 1 ขั้นตอนที่ 1 ในขณะที่เครื่องคำนวณ Excel และเครื่องคำนวณกราฟสามารถกำหนดตัวแบบเชิงเส้นนี้ได้อย่างง่ายดาย คุณสามารถหาค่าประมาณการถดถอยได้ ความชันของเส้นตรงโดยการหารความแตกต่างของความเข้มข้นของผลิตภัณฑ์ระหว่างจุดข้อมูลที่อยู่ติดกันด้วยความแตกต่างของเวลา
บันทึกความชันของเส้นการถดถอยเชิงเส้นจากส่วนที่ 1 ขั้นตอนที่ 2 เป็น "ความเร็วปฏิกิริยาเริ่มต้น (Vo)" หมายเหตุ: ในแบบจำลองเส้นถดถอย "[ความเข้มข้นของผลิตภัณฑ์] = m [เวลา] + b" สัมประสิทธิ์ "m" คือ ความลาดชัน
ทำซ้ำขั้นตอนที่ 1, 2 และ 3 สำหรับหลอดทดลองที่เหลือในการทดสอบ
วาดค่าผกผันของความเข้มข้นของซับสเตรตสำหรับหลอดทดลองแต่ละหลอดเทียบกับค่าผกผันของความเร็วปฏิกิริยาเริ่มต้น (จากส่วนที่ 1 ขั้นตอนที่ 4) ตัวอย่างเช่น ถ้าความเร็วเริ่มต้นสำหรับหลอดทดลองที่มีความเข้มข้นของซับสเตรตเริ่มต้นที่ 50 ไมโครโมลาร์ (uM) คือ 80 uM/s ส่วนผกผันจะเป็น 1/50 uM สำหรับความเข้มข้นของซับสเตรตและ 1/80 uM/s สำหรับค่าเริ่มต้น ความเร็ว. หมายเหตุ: ความเข้มข้นของซับสเตรตผกผันควรอยู่บนแกนนอน และความเร็วเริ่มต้นผกผันควรอยู่บนแกนตั้ง
หมายเหตุ: ความเข้มข้นของสารตั้งต้นควรอยู่บนแกนนอน และความเร็วของปฏิกิริยาเริ่มต้นควรอยู่บนแกนตั้ง
กำหนดเส้นถดถอยเชิงเส้นสำหรับแผนภูมิที่คุณลงจุดในส่วนที่ 2 ขั้นตอนที่ 1 หมายเหตุ: เนื่องจากคุณจำเป็นต้องรู้จุดตัด y ของเส้นถดถอย คุณจึงควรป้อนจุดจาก ส่วนที่ 2 ขั้นตอนที่ 1 ใน Excel หรือเครื่องคิดเลขกราฟ และใช้แบบจำลองการถดถอยที่มีอยู่แล้วภายใน ฟังก์ชั่น
หาร 1 ด้วยจุดตัด y จากเส้นถดถอยเชิงเส้น สิ่งนี้จะให้ค่าผกผันของ Vmax ซึ่งเป็นความเร็วปฏิกิริยาสูงสุดของเอนไซม์ หมายเหตุ: หากตัวแบบการถดถอยเชิงเส้นอยู่ในรูปแบบ "[Inverse Vo] = m [Inverse Substrate Conc.] + b" ค่าของ "b" จะเท่ากับจุดตัด y หาร 1 ด้วย "b" เพื่อคำนวณค่าผกผันของ Vmax
หาร 1 ด้วยผลลัพธ์จากส่วนที่ 2 ขั้นตอนที่ 3 เพื่อคำนวณมูลค่าที่แท้จริงของ Vmax
กำหนดความเข้มข้นของเอนไซม์ในการทดสอบดั้งเดิม (ดูข้อมูลดิบ) หมายเหตุ: ความเข้มข้นของเอนไซม์จะเท่ากันสำหรับหลอดทดลองทั้งหมด ความเข้มข้นของซับสเตรตเท่านั้นที่จะแปรผันในการทดสอบ
แบ่ง Vmax (จากส่วนที่ 2, ขั้นตอนที่ 4) ด้วยความเข้มข้นของเอนไซม์ (จากส่วนที่ 2, ขั้นตอนที่ 5) ผลลัพธ์ที่ได้คือค่า Kcat
Andy Pasquesi นักเขียนคำโฆษณาในชิคาโก มีประสบการณ์มากมายในการเขียนเกี่ยวกับยานยนต์ (BMW, MINI Cooper, Harley-Davidson), บริการทางการเงิน (Ivy Funds, William Blair, T. Rowe Price, CME Group), ลูกค้าด้านการดูแลสุขภาพ (Abbott) และสินค้าอุปโภคบริโภค (Sony, Motorola, Knoll) เขาจบศิลปศาสตรบัณฑิตเป็นภาษาอังกฤษจากมหาวิทยาลัยฮาร์วาร์ดแต่ไม่สนใจเครื่องหมายจุลภาคอ็อกซ์ฟอร์ด