DNA
Deoxiribonukleinsyra och proteiner. DNA är organiserat i enheter som kallas gener, var och en kodar för en viss RNA- eller proteinsekvens. Gener studeras för att lära sig om biologisk struktur och funktion, evolution, sjukdom och många andra aspekter av levande system. För att studera gener i detalj måste DNA isoleras och renas från celler av intresse.
DNA-extraktion
Även om DNA från en enda cell kan extraheras och studeras räcker det inte att se med blotta ögat. För att få en mängd som är tillräcklig för spolning, desto fler celler måste du arbeta med desto bättre (många miljoner).
Exakta protokoll varierar avsevärt för att ta hänsyn till de unika egenskaperna hos specifika prover, men de allmänna stegen är homogenisering, lys, matsmältning, separation och insamling. Proceduren utförs bäst i ett litet (beroende på provets storlek) glas eller plaströr.
Ett prov blandas i allmänhet eller males för att grundligt separera cellerna från varandra. Detta gör cellingredienserna mer tillgängliga för de reagens som följer. Rengöringsmedel eller enzymer tillsätts sedan till homogenatet för att lysera cellmembranen (och kärnmembran om cellerna är eukaryota) för att frigöra DNA. Vid den här tiden omges DNA av proteiner, lipider, karbohydrat allt annat som fanns i cellerna.
Ytterligare en enzymatisk nedbrytning kan vara nödvändig för att bryta ner proteiner så att de inte binder till DNA och stör dess insamling. DNA separeras från resten av cellinnehållet genom tillsats av kall, ren, etyl- eller isopropylalkohol. DNA är inte lösligt i dessa alkoholer så det kommer att kondensera för att försöka minimera dess kontakt med alkoholen. De kondenserade DNA: n samlas sedan upp, vanligtvis genom centrifugering eller spolning.
DNA-spolning
DNA-insamling genom spolning är effektiv när en stor mängd DNA erhålls från ett extraktionsförfarande. Det är också en utmärkt demonstrationsmetod eftersom ett imponerande virvar av rent DNA är tydligt synligt.
För att spola DNA måste separationssteget utföras noggrant. Om det inte var en del av lyseringsreagensblandningen som tidigare tillsatts, måste en koncentrerad saltlösning (natriumklorid) tillsättas till lösningen innan alkoholtillsatssteget. Den kalla alkoholen hälls långsamt ner på provrörets sida för att bilda ett skikt ovanpå den vattenhaltiga lösningen, vilket undviker blandning. Om det görs korrekt kommer alkoholen att bilda sitt eget lager ovanpå det salta lagret. Sedan kommer spolen.
För att samla in DNA från det salta skiktet, placera försiktigt en glasrörstång genom alkoholskiktet tills det berör rörets botten. Snurra långsamt stången mellan fingrarna medan du tittar på gränssnittet mellan de två lagren. Om tillräckligt med DNA är närvarande kommer det att klumpas ihop vid gränsytan mellan skikten för att bilda en mjölkaktig genomskinlig massa. Snurra stången för att linda DNA-enheten runt den (det vill säga spolningsdelen) och dra ut den ur röret. DNA kan överföras till ett annat rör med ren alkohol för lagring eller vidare analys.