Tekoča hranilna juha se uporablja za gojenje bakterij, kot je Escherichia coli. Recepti za to juho se razlikujejo glede na vrsto bakterij in prisotnost genskih sprememb, npr. Odpornost na antibiotike. Juho lahko strdiš z dodajanjem agarja, ki omogoča bakterijam, da tvorijo različne kolonije, medtem ko se v tekoči kulturi preprosto razpršijo po celotni prostornini. To je osnovna, a bistvena tehnika za napredne metode, kot so kloniranje genov ali mikrobiološki testi. Ta članek predvideva, da je treba standardne laboratorijske seve Escherichia coli gojiti na agarnih ploščah (ali petrijevkah) z juho Luria (LB).
Natehtamo 10 gramov bakterijskega triptona, 5 gramov ekstrakta kvasa, 5 gramov natrijevega klorida, 15 gramov agarja ali agaroze in 1 mililiter 1N natrijevega hidroksida. Mešajte jih s količino destilirane in v avtoklavu sterilne vode, dokler ne dobite 1 litra medija. Medij v avtoklavu 25 minut puščajte v steklenicah ali bučkah. Pustite, da se ohladi na približno 50 stopinj Celzija, preden dodate reagente, ki bodo uničeni pri močni vročini, kot so antibiotiki ali drugi prehranski dodatki.
Pustite, da se medij v avtoklavu ohladi na 50 stopinj Celzija in ne nižje od 45 stopinj Celzija, saj se bo agar strgal v posodo, preden ga bo mogoče vliti. Pridobite sterilne petrijevke in nalijte toliko, da pokrije celotno površino plošče in vsaj polovico njene globine. Izogibajte se prekomernemu polnjenju plošč in po možnosti ne dovolite, da se agar dotakne zgornjega roba posode. Pustite, da se plošče strdijo v sterilnem okolju (npr. Pod laminarnim pokrovom), tako da pokrov pustite spuščen in do vogala nape.
Krožnike posušimo. Čeprav lahko plošče uporabimo takoj, ko jih nastavimo, bo na površini agarja prisotno nekaj vlage, kar bo preprečilo zadostno oprijemanje kolonij bakterij. Zato je najbolje, da plošče posušite pred nanosom bakterij, na primer tako, da jih pustite sedeti sobna temperatura nekaj dni ali pol ure pod laminarnim pokrovom ali pri 37 stopinjah Celzija inkubator.
Shranite krožnike. Posušene krožnike je treba zložiti na glavo (obrniti) na pokrove in vrniti v prvotne embalažo, zalepljeno s trakom in zavito v folijo za zaščito pred svetlobo ali v ustrezno posoda. Na plošče vedno napišite datum priprave in se izogibajte uporabi, če so plošče starejše od 2 mesecev.
Reference
- "Trenutni protokoli v molekularni biologiji"; Karen Elbing in Roger Brent; 2002
Nasveti
- Izvedite čim več zgornjih korakov (po možnosti vseh) v sterilnem okolju (npr. Pod odprti plamen ali pokrov laminarnega toka), da prepreči vstop in rast zračnih bakterijskih onesnaževal v medijev.
O avtorju
Palmer Owyoung je magistriral iz mednarodnega poslovanja na Kalifornijski univerzi v San Diegu in Diplomirani umetnik sociologije na Kalifornijski univerzi v Santa Barbari in je izobražen molekulec biolog. Od leta 2006 je svobodni pisatelj. Poleg tega, da piše, je redni trgovec s Forexom in prodajalec interneta.
Foto krediti
Jupiterimages / Comstock / Getty Images
