Vývar s tekutými výživami sa používa na kultiváciu baktérií, ako je napríklad Escherichia coli. Recepty tohto bujónu sa líšia v závislosti od bakteriálnych druhov a prítomnosti genetických modifikácií, napr. Rezistencie na antibiotiká. Bujón je možné stuhnúť pridaním agaru, ktorý umožňuje baktériám vytvárať odlišné kolónie, zatiaľ čo v tekutej kultúre sa jednoducho dispergujú v celom objeme. Toto je základná, ale nevyhnutná technika pre pokročilé metódy, ako je klonovanie génov alebo mikrobiologické testy. Tento článok predpokladá, že štandardné laboratórne kmene Escherichia coli sa majú kultivovať na agarových platniach s bujónom Luria (LB) (alebo na Petriho miskách).
Odvážte 10 gramov tryptónu bakteriálnej kvality, 5 gramov kvasnicového extraktu, 5 gramov chloridu sodného, 15 gramov agaru alebo agarózy a 1 mililiter 1N hydroxidu sodného. Zmiešajte ich s objemom destilovanej a autoklávovanej sterilnej vody, až kým nezískate 1 liter média. Médiá autoklávujte vo voľne uzatvorených fľašiach alebo bankách po dobu 25 minút. Pred pridaním reagencií, ktoré sa zničia pri vysokej teplote, napríklad antibiotík alebo iných doplnkov výživy, ich nechajte vychladnúť na približne 50 stupňov Celzia.
Nechajte autoklávované médium vychladnúť na 50 stupňov Celzia a najmenej 45 stupňov Celzia, pretože agar sa pred naliatím usadí v nádobe. Pripravte si sterilné Petriho misky a nalejte ich toľko, aby pokryli celú plochu taniera a najmenej polovicu jeho hĺbky. Vyvarujte sa preplneniu tanierov a najlepšie, keď sa agar nedotýka horného okraja misky. Doštičky nechajte stuhnúť v sterilnom prostredí (napr. Pod krytom s laminárnym prúdením) tak, že necháte viečka odstavené a v rohu kukly.
Dosky osušte. Aj keď je možné doštičky použiť hneď po položení, na povrchu agaru bude prítomná určitá vlhkosť, ktorá zabráni dostatočnému priľnutiu bakteriálnych kolónií. Najlepšie je preto platne pred aplikáciou akýchkoľvek baktérií vysušiť, napríklad tak, že ich necháte sedieť izbová teplota niekoľko dní alebo pol hodiny pod digestorom s laminárnym prúdením alebo pri 37 stupňoch Celzia inkubátor.
Taniere uložte. Sušené taniere by mali byť na vrchnáky naskladané naopak (obrátene) a vrátené do pôvodného stavu obale, prelepené páskou a zabalené do fólie na ochranu pred svetlom alebo vhodným spôsobom kontajner. Na misky vždy napíšte dátum prípravy a nepoužívajte, ak sú misky staršie ako 2 mesiace.
Referencie
- „Súčasné protokoly v molekulárnej biológii“; Karen Elbing a Roger Brent; 2002
Tipy
- Vykonajte čo najviac z vyššie uvedených krokov (najlepšie všetky) v sterilnom prostredí (napr. Pod otvorený plameň alebo odsávač pár s laminárnym tokom), ktorý zabráni prenikaniu vzduchom prenášaných bakteriálnych kontaminantov do a rozširovaniu v nich médiá.
O autorovi
Palmer Owyoung je držiteľom titulu Master of Arts v medzinárodnom obchode na Kalifornskej univerzite v San Diegu a Bakalár sociológie na Kalifornskej univerzite v Santa Barbare je vyštudovaný molekulárny pracovník biológ. Od roku 2006 je spisovateľom na voľnej nohe. Okrem písania sa venuje obchodovaniu na Forex-e na plný úväzok a internetovému marketingu.
Fotoúvery
Jupiterimages / Comstock / Getty Images