Živný agar je druh komplexného média na všeobecné použitie, ktoré sa používa hlavne na kultiváciu rôznych mikroorganizmov.
Komplexné médiá mikrobiológia sú rastové médiá, ktoré sa skladajú z radu dostupných molekúl živín a bielkovín v neznámych koncentráciách. Živný agar sa používa na kultiváciu nenáročných mikróbov, ako sú baktérie a kvasinky.
Čo rastie na živnom agare?
Mikroorganizmy potrebujú na prežitie a rast jedlo, vodu a vhodné prostredie. Živný agar poskytuje tieto zdroje pre mnoho druhov mikróbov od huby ako kvasinky a plesne na bežné baktérie ako napr Streptokok a Staphylococcus.
Mikróby, ktoré je možné pestovať na komplexných médiách, ako je napríklad živný agar, možno označiť ako nehorázne organizmy. Neorganizujúce organizmy sú mikróby, ktoré sú schopné rásť a prosperovať bez špeciálnych výživových alebo environmentálnych podmienok.
Niektoré baktérie nemožno pestovať na živnom agare. Náročné organizmy (vyberavé baktérie) môže potrebovať veľmi špecifický zdroj potravy, ktorý sa nenachádza v živnom agare. Jedným z príkladov náročného organizmu je
Treponema pallidum, baktérie, ktoré spôsobujú syfilis. Vedci sa neúspešne snažia túto baktériu pestovať v kultúre už viac ako 100 rokov.Živný agar sa môže použiť na kultiváciu mikroorganizmov na rôzne účely. Jedným z použití je kultivácia a údržba špecifických kolónií ne rýchlych organizmov na účely vedeckého štúdia alebo identifikácie. Ďalším využitím je detekcia a kvantifikácia prítomnosti potenciálne škodlivých látok baktérie alebo iné mikróby vo vode, odpadových vodách, mäkkýšoch, mäse, mliečnych výrobkoch a iných potravinárskych výrobkoch.
Médium musí byť udržiavané sterilné, aby sa zabezpečilo, že jediné rastúce mikróby sú tie, ktoré sú určené na kultiváciu a že nerastú v dôsledku kontaminácie média.
Zložky výživného agaru
Hlavný zložky v živnom agare sú peptón, hovädzí extrakt a agar. Tieto zložky sa práškujú a potom sa pridajú do destilovanej vody. Špecifické zloženie živín agar sa môžu mierne líšiť v závislosti od výrobcu a zdroja použitých prísad.
Zloženie pripraveného živného agarového média je 0,5% peptónu, 0,3% hovädzieho extraktu (alebo kvasnicového extraktu), 1,5% agaru a 0,5% chloridu sodného.
Definovať agar
Pri definovaní agaru myslite na komplexný sacharid pochádzajúci z morských červených rias, ktorý v živnom médiu funguje ako tuhnúce činidlo. Pre kultiváciu mikróbov nemá žiadnu výživovú hodnotu.
Agarový gél pri teplote 113 stupňov Fahrenheita (45 stupňov Celzia) a topí sa pri teplote 203 stupňov Fahrenheita (95 stupňov Celzia). Agar zahŕňa aj potravinárske odrody, ktoré sa dajú použiť ako zahusťovacie prísady do polievok, želé a iných jedál.
Definícia peptónu
The definícia peptónu je rozpustný proteín tvorený v počiatočných štádiách štiepenia bielkovín počas procesu trávenia. Vyrába sa čiastočným strávením bielkovinových materiálov, ako je mäso, želatína a kazeín, pomocou kyselín alebo enzýmy.
Účelom peptónu v živnom agare je poskytnúť primárny zdroj organického dusíka pre rastúcu mikrobiálnu kultúru a môže to byť tiež zdroj uhľohydrátov a vitamínov. Presné zloženie peptónu v živnom médiu sa bude líšiť v závislosti od zdroja bielkovín a spôsobu trávenia.
Hovädzí extrakt
The hovädzí výťažok na výrobu živného agaru sa používa zmes vo vode rozpustných častíc živočíšneho tkaniva, uhľohydrátov, organických zlúčenín dusíka, vitamínov a soli.
Kvasnicový extrakt sa môže tiež použiť na prípravu výživného agaru a poskytuje podobné zlúčeniny. Účelom zlúčenín v hovädzom extrakte je pomôcť pri raste baktérií kultivovaných na živnom agare.
Destilovaná voda
Destilovaná voda sa obvykle používa na prípravu živného agarového média. Destilovaná voda je voda, ktorá bola spracovaná na odstránenie všetkých rozpustených kontaminantov a minerálov.
Destilovaná voda prítomná v živnom agare je nevyhnutná pre životné procesy mikroorganizmov, ktoré tam rastú, rovnako ako voda je nevyhnutná pre životné procesy všetkých živých tvorov. Pridanie chloridu sodného do zmesi robí prostredie kultúry podobné cytoplazma.
Príprava živného agaru
Aby poriadne pripravte si výživnú agarovú zmes pre bakteriálnu kultúru je dôležité postupovať podľa konkrétnych pokynov poskytnutých výrobcom výživných látok. Niektoré zložky alebo množstvá sa môžu mierne líšiť v závislosti od zdroja výživného agaru.
- 28 gramov práškového živného agaru sa rozpustí v jednom litri destilovanej vody.
- Zmes za stáleho miešania zahrejeme k varu. Ďalej varte a miešajte zmes asi jednu minútu alebo kým sa nerozpustí všetok prášok.
- Rozpustená zmes sa autoklávuje počas 15 minút pri teplote 249,8 stupňov Fahrenheita (121 stupňov Celzia).
- Agarovú zmes nechajte mierne vychladnúť. Dávkujte do tanierov alebo rúrok. Nechajte stuhnúť.
- Vráťte viečka na nové a skladujte v chladnom, tmavom a sterilnom prostredí, napríklad v chladničke. Uložiť agarové platne (Petriho misky) hore dnom, aby sa zabránilo kondenzácii na médiu.
Konečné pH pripraveného živného agarového média by malo byť 6,8. Médium by malo byť svetlo jantárovej farby a malo by mať konzistenciu pevnej želatíny. Pripravené živné agarové médium by malo vydržať v chladničke až dva roky, pokiaľ nedôjde k výraznej zmene vzhľadu média, ktorá by naznačovala kontamináciu.