Vedci a technici často musia vypočítať koncentráciu buniek v suspenzii. Napríklad, keď si pacient nechá odobrať krv v lekárskej ordinácii, môže laboratórium pomocou určitých metód zistiť množstvo bielych krviniek v danom objeme krvi. To dáva lekárke veľa informácií o zdraví jej pacienta, najmä o jeho imunitnom systéme a o tom, či bojuje s infekciou alebo iným ochorením. Takéto testy môžu vyhľadávať mnoho ďalších buniek v krvi, ako aj miechovú tekutinu a ďalšie telesné tekutiny, ako je napríklad počet spermií v semene na účely plodnosti. Vedci tiež počítajú bunkové koncentrácie baktérií, kvasiniek a iných mikroorganizmov na rôzne účely, od ekologického výskumu po priemyselné technológie. Jedna z najbežnejších techník sa tiež vyučuje na mnohých hodinách biológie na vysokej škole a používa sa na ňu zariadenie nazývané počítacia komora.
Predtým, ako môže bunková suspenzia vstúpiť do počítacej komory, bude možno potrebné ju zriediť, pretože môže obsahovať tisíce alebo milióny buniek. V takom prípade nemožno bunky primerane spočítať. Na zriedenie vzorky použite sterilnú pipetu na vloženie desiatich mikrolitrov bunkového roztoku do skúmavky obsahujúcej 90 mikrolitrov riedidla. Typ riedidla bude závisieť od typu bunky. Dobre to premiešajte. Tento roztok je teraz desaťkrát viac zriedený ako pôvodná vzorka, takže jeho faktor zriedenia je 10
Možno budete musieť vyskúšať niekoľko zriedení, aby ste určili správny faktor zriedenia pre počítaciu komoru. Počítacia komora je v podstate veľmi malá, jasná, obdĺžniková škatuľka s presnou hĺbkou a presnou mriežkou vpísanou cez vrch. Je tiež známy ako hemocytometer alebo niekedy hemacytometer. Cieľom je, aby bola suspenzia dostatočne zriedená, aby sa pri pozorovaní v počítacej komore neprekrývali žiadne bunky a boli rovnomerne rozložené v mriežke. Napipetujte zriedenú suspenziu obsahujúcu bunky do jamky v počítacej komore, kde sa kapilárnym pôsobením usadí v mriežkovej komore. Umiestnite počítaciu komoru na stolík mikroskopu a sledujte ju pri nízkom výkone.
Mriežka obsahuje štvorce, ktoré sú vyrobené z ešte menších štvorcov. Vyberte približne štyri alebo päť štvorcov alebo toľko, koľko potrebujete, aby ste spočítali najmenej 100 buniek, podľa vzoru podľa vášho výberu, napríklad štyri rohy a stredový štvorec. Ak sú bunky veľké, môžu to byť veľké štvorce, ale ak sú bunky malé, môžete zvoliť menšie štvorce.
Konkrétny objem každého štvorca mriežky sa môže líšiť podľa výrobcu počítajúcej komory, ale hĺbka komory je často 0,1 milimetre, plocha veľkých štvorcov je 1 štvorcový milimeter a plocha menších štvorcov je 0,04 štvorca milimetrov. Väčšie štvorce potom majú objem 0,1 milimetra kubického. V tomto príklade predpokladajme, že ste napočítali celkom 103 buniek na päť štvorcov a že ste zriedili počiatočnú vzorku, kým faktor zriedenia nebol 10.-2.
Pokiaľ má každý štvorec mriežky objem 0,1 milimetra kubického a bolo spočítaných päť, potom bol celkový objem počítanej komory 0,5 milimetra kubického a bolo tam 103 buniek. Zdvojnásobený na 1 kubický milimeter by z neho urobil 206 buniek. Jeden centimeter kubický zodpovedá 1 mililitru, čo je užitočné meranie pre kvapaliny. V kubickom centimetri je 1 000 kubických milimetrov. Ak by teda bol suspenzia v centimetroch kubických alebo v mililitroch, napočítali by ste 206 000 (206 x 1 000) buniek. Takto to vyzerá ako rovnica:
Objem štvorca mriežky × počet spočítaných štvorcov = celkový objem spočítanej suspenzie
Počet buniek ÷ objem počítanej suspenzie = počet buniek na milimetre kubické
Počet buniek na milimetre kubické × 1000 = počet buniek na mililiter
Budete musieť vziať do úvahy každé vykonané zriedenie, aby bolo možné počiatočný roztok spočítať pod mikroskopom. V tomto príklade je zrieďovací faktor 10-2. Výpočet počiatočnej koncentrácie roztoku:
Počet buniek na mililiter ÷ zrieďovací faktor = koncentrácia buniek
V tomto príklade je počet buniek na mililiter 206 000 a vydelíme ho 10-2 (0,01) poskytuje koncentráciu buniek 20 600 000 buniek na mililiter v počiatočnej vzorke.
