Como uma amostra é preparada para visualização ao microscópio?

Um reino anteriormente invisível foi revelado no início de 1600 com a construção dos primeiros microscópios compostos que levou a grandes revisões no entendimento científico. Os microscópios compostos básicos são agora equipamentos padrão na medicina e nas ciências naturais. A luz visível transmitida brilha através de preparações finas para ampliação. Microscópios eletrônicos de transmissão e varredura desenvolvidos a partir de 1931. Eles não usam luz óptica, mas feixes de elétrons e campos magnéticos para visualizar as amostras. Principalmente para pesquisas institucionais, a preparação de amostras requer equipamentos complexos e caros.

Existem vários tipos especializados de microscópios compostos, mas os microscópios de campo claro são os mais comuns. As amostras para eles devem ter apenas vários mícrons, o que é um milionésimo de metro de espessura. Amostras mais espessas não deixam passar luz suficiente e não permitem foco preciso. Os microscópios de campo claro têm um tubo com lentes objetivas na parte inferior, mais próximo da amostra, e uma lente ocular, ou ocular, na parte superior. Várias lentes objetivas de diferentes ampliações giram em um revólver porta-objetivas ou torre. O estágio logo abaixo do porta-objetivas mantém a lâmina de amostra e, abaixo dela, uma fonte de luz brilha através de um condensador até a amostra. Microscópios compostos modernos podem ampliar um objeto de 1.000 a 2.000 vezes suas dimensões originais.

Para itens pequenos, como cabelos, pequenos insetos, partes de insetos ou grãos de pólen, a amostra é colocada diretamente na parte central de um lâmina de microscópio de vidro ou plástico com uma pequena quantidade de meio de montagem, geralmente um produto de resina sintética ou natural para slides. Para lâminas temporárias, como uma gota de água de lagoa contendo microorganismos, a água é o meio de montagem. Proteja as amostras com uma lamela, um pedaço redondo ou quadrado muito fino de vidro ou plástico. Algumas amostras precisam de coloração com corantes naturais ou sintéticos destinados à microscopia para serem bem vistas.

Uma maneira simples de preparar uma amostra fina é esmagar ou achatar um pequeno pedaço de tecido sob a lamínula. Freqüentemente usado em amostras de plantas para ver os cromossomos, tecidos de crescimento rápido, como pontas de raízes ou anteras submetidos à divisão celular são preservados em fixador, então amolecidos e tingidos para revelar o cromossomos. A pressão suave da ponta da borracha de um lápis centralizado sobre a amostra deslizada força as células a se separarem em uma única camada. Em esfregaços, a amostra é espalhada finamente em uma lâmina usando outra lâmina como espalhador, e o esfregaço resultante é seco e tingido. Na medicina, amostras de fluidos corporais, como sangue, fluido cérebro-espinhal ou sêmen, são borradas.

Um procedimento de corte mais complicado ocorre quando a estrutura e a organização de um organismo pequeno inteiro ou de um pedaço de tecido precisam ser estudados. Para a maioria das amostras, primeiro o tecido é preservado e endurecido e a água removida. Em seguida, a amostra é incorporada em um meio rígido, como cera ou plástico, e cortada em seções muito finas de apenas vários mícrons de espessura, usando uma máquina de precisão chamada micrótomo. A amostra é orientada para fornecer seções transversais ou longitudinais quando fatiada. As seções são coladas em lâminas de microscópio, o meio de inclusão é removido e os tecidos são corados para diferenciar estruturas e células. Onde a velocidade é essencial, como em biópsias cirúrgicas para câncer, as amostras são congeladas, cortadas com um micrótomo de congelamento, coradas e examinadas.