DNA
Ácido desoxirribonucléico e proteínas. O DNA é organizado em unidades chamadas genes, cada um dos quais codifica um determinado RNA ou sequência de proteína. Os genes são estudados para aprender sobre a estrutura e função biológica, evolução, doença e muitos outros aspectos dos sistemas vivos. Para estudar os genes em detalhes, o DNA deve ser isolado e purificado das células de interesse.
Extração de DNA
Embora o DNA de uma única célula possa ser extraído e estudado, não é o suficiente para ver a olho nu. Para obter uma quantidade suficiente para o spool, quanto mais células você tiver para trabalhar, melhor (muitos milhões).
Os protocolos exatos variam consideravelmente para levar em conta as características únicas de amostras específicas, mas as etapas gerais são homogeneização, lise, digestão, separação e coleta. O procedimento é melhor realizado em um tubo de vidro ou plástico pequeno (dependendo do tamanho da amostra).
Uma amostra é geralmente misturada ou triturada para separar completamente as células umas das outras. Isso torna os ingredientes da célula mais acessíveis aos reagentes que se seguem. Detergente ou enzimas são então adicionados ao homogenato para lisar as membranas celulares (e as membranas nucleares se as células forem eucarióticas) para liberar o DNA. Nesse ponto, o DNA está rodeado por proteínas, lipídios, carboidratos e tudo o mais que estava contido nas células.
Uma digestão enzimática adicional pode ser necessária para quebrar as proteínas, de forma que elas não se liguem ao DNA e interfiram com sua coleta. O DNA é separado do resto do conteúdo da célula pela adição de álcool frio, puro, etílico ou isopropílico. O DNA não é solúvel nesses álcoois, então ele se condensará para tentar minimizar seu contato com o álcool. O DNA condensado é então coletado, geralmente por centrifugação ou bobinamento.
Spool de DNA
A coleta de DNA por enrolamento é eficaz quando uma grande quantidade de DNA é obtida em um procedimento de extração. É também um excelente método de demonstração, uma vez que um impressionante emaranhado de DNA puro é claramente visível.
Para fazer o spool do DNA, a etapa de separação deve ser realizada com cuidado. Se não fizer parte da mistura do reagente de lise adicionada anteriormente, uma solução salina concentrada (cloreto de sódio) deve ser adicionada à solução antes da etapa de adição de álcool. O álcool frio é lentamente despejado na lateral do tubo de ensaio para formar uma camada sobre a solução aquosa, evitando misturar. Se feito corretamente, o álcool formará sua própria camada sobre a camada salgada. Em seguida, vem o enrolamento.
Para coletar o DNA da camada salgada, coloque cuidadosamente uma vareta de mistura de vidro na camada de álcool até que toque o fundo do tubo. Gire lentamente a haste entre os dedos, enquanto observa a interface entre as duas camadas. Se DNA suficiente estiver presente, ele se agrupará na interface entre as camadas para formar uma massa translúcida leitosa. Gire a haste para envolver o DNA em torno dela (que é a parte do carretel) e puxe-a para fora do tubo. O DNA pode ser transferido para outro tubo de álcool puro para armazenamento ou análise posterior.