Os cientistas usam a citometria de fluxo para diferenciar entre diferentes tipos de células ou organismos microscópicos. É uma ferramenta usada em muitas aplicações, como diagnósticos médicos ou patologia forense. Embora esta técnica experimental seja bastante fácil de realizar, a análise dos dados complexos produzidos pelo citômetro de fluxo é mais difícil devido aos múltiplos fatores experimentais e / ou citômetro parâmetros. Como tal, é rotina que os dados citométricos sejam visualizados e analisados usando programas profissionais sofisticados, como CELLQuest ou FlowJo. Familiaridade com técnicas de citometria de fluxo, máquinas e software é necessária para compreender os resultados produzidos por estes experimentos.
Esclareça o objetivo do experimento perguntando: "Qual era a questão ou hipótese sendo investigada?" Isto será necessário para ajustar os resultados brutos para o formato e configurações apropriados para análise posterior usando citometria estatística Programas. Faça todas as alterações necessárias para que os dados sejam exibidos com as configurações relevantes (por exemplo, células positivas, portas negativas, intensidade de fluorescência, populações de células, etc.).
Encontre portões. As células podem ser agrupadas ou simplesmente observadas agrupadas em um gráfico de densidade ou diagrama de contorno. Os grupos geralmente se separam dependendo de sua identidade. Se um grupo cora muito intensamente para um marcador ou anticorpo particular, conclui-se que todos os membros desse grupo têm a identidade do tipo de célula específico, que expressa aquele marcador. É comum encontrar células que são positivas para mais de um desses marcadores, e essas células são geralmente um intermediário e denotadas como "duplamente positivas".
Observe os gráficos de dispersão. A forma como os grupos de células se espalham em um gráfico de dispersão é uma indicação do tamanho das células. As células com dispersões muito grandes ou altas são geralmente células grandes; no entanto, eles podem ser grandes simplesmente porque contêm uma alta proporção de citoplasma, ou podem ser altos porque têm um núcleo muito grande. Dependendo da biologia que está sendo investigada, isso irá, é claro, variar amplamente entre os experimentos.
Veja os números. Ajuste os gráficos para exibir diferentes parâmetros em um eixo (geralmente o eixo X) enquanto mantém as contagens no eixo Y. Isso indica a proporção da população da amostra que é positiva para aquele parâmetro específico, como um pico normalmente será observado em uma amostra corada positivamente, que estará ausente do controle negativo amostra.
Observe os histogramas de vários parâmetros. Ajustando o eixo X e o eixo Y para cada um representar um parâmetro diferente que foi investigado durante o experimento, é possível obter um entendimento mais profundo das propriedades da amostra. Por exemplo, ao definir o eixo X para fluorescência vermelha e o eixo Y para fluorescência verde, portas de estilo quadrante podem ser calculadas para o amostra para mostrar quatro regiões de um quadrante em que as células estão presentes e coradas para fluorescência vermelha ou verde, ambas as cores, ou nenhuma em tudo. Isso permite que uma amostra heterogênea seja dividida em suas partes componentes e quaisquer entidades sobrepostas sejam visualizadas e quantificadas.
Referências
- “Análise de dados de citometria de fluxo”; Susan Sharrow; 1991
- “Citometria de fluxo: instrumentação e análise de dados”; Marvin Van Dila; 1985
- “Protocolos de citometria de fluxo”; Teresa e Robert Hawley; 2004
Sobre o autor
Palmer Owyoung tem mestrado em negócios internacionais pela Universidade da Califórnia em San Diego e um Bacharel em Sociologia pela Universidade da Califórnia em Santa Bárbara e é um molecular formado biólogo. Ele é escritor freelance desde 2006. Além de escrever, ele é um comerciante de Forex em tempo integral e comerciante da Internet.
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