Depois de executar as amostras de DNA em um gel de agarose e tirar uma foto, você pode salvar a imagem para mais tarde, quando poderá analisar os resultados e interpretá-los. Os tipos de coisas que você está procurando dependerão da natureza do seu experimento. Se você estiver fazendo impressões digitais de DNA, por exemplo, vai querer comparar o tamanho de pedaços de DNA de duas amostras - do suspeito e de uma amostra da cena do crime, talvez. Se você estiver trabalhando com plasmídeos de bactérias, por outro lado, pode ser necessário verificar se o plasmídeo contém a inserção. Conseqüentemente, como você interpreta o seu gel dependerá em parte do experimento que você fez. No entanto, existem algumas regras gerais que você pode aplicar.
Observe que você pode ou não precisar usar as instruções nesta seção. A eletroforese em gel de agarose é freqüentemente usada para confirmar que um plasmídeo contém uma determinada inserção. Se você não estiver trabalhando com plasmídeos, pode pular esta seção. Se for, no entanto, você pode seguir estas instruções.
Observe que se você estiver trabalhando com plasmídeos não cortados ou cortados, não será possível estimar o tamanho usando o procedimento da seção 1 acima. Isso ocorre porque os plasmídeos não cortados e cortados migram em taxas diferentes do DNA linear.
Compare o número de bandas em cada pista. Lembre-se de que uma enzima de restrição corta o DNA em locais onde ocorre uma determinada sequência chamada local de restrição. Se uma amostra foi tratada com DUAS enzimas de restrição, uma banda para a inserção e uma banda para o restante do plasmídeo devem estar presentes. Isso porque a inserção será flanqueada por dois locais de restrição, cada um para uma enzima diferente, portanto, cortes em ambos os locais liberarão a inserção do plasmídeo. Em contraste, um corte em apenas um local irá converter o plasmídeo em DNA linear. Um corte de amostra sem enzimas de restrição ou uma enzima de restrição, então, deve apresentar uma única banda, enquanto um corte de amostra com duas enzimas de restrição deve apresentar duas bandas.
Esteja atento às bandas criadas por DNA de plasmídeo cortado. Um plasmídeo cortado tem um corte em uma única fita apenas, então ele migra mais lentamente do que um plasmídeo cortado. Os plasmídeos cortados, por sua vez, migram mais lentamente do que o DNA não cortado.
Estime o tamanho da inserção usando o procedimento descrito na Seção 1 e determine se ela corresponde às suas expectativas (que irão variar dependendo do experimento).
Coisas que você precisa
- Lápis
- Papel
- Programa de planilha
- Foto do seu gel
- governante