Chemicy stosują wysokosprawną chromatografię cieczową (HPLC) do rozdzielania mieszanin związków. Ogólnie rzecz biorąc, metoda polega na wstrzyknięciu próbki do kolumny, gdzie miesza się z jednym lub większą liczbą rozpuszczalników. Różne związki adsorbują lub „przyklejają się” do kolumny w różnym stopniu; a gdy rozpuszczalnik przepycha związki przez kolumnę, jeden ze składników mieszaniny opuści kolumnę jako pierwszy. Urządzenie wykrywa związki wychodzące z kolumny i tworzy chromatogram, który składa się z wykresu z czasem retencji na osi x i intensywnością sygnału z detektora na osi y. Gdy związki opuszczają kolumnę, tworzą „piki” na chromatogramie. Ogólnie rzecz biorąc, im dalej od siebie i im węższe piki na chromatogramie, tym wyższa rozdzielczość. Naukowcy uważają, że rozdzielczość 1,0 lub wyższa reprezentuje odpowiednią separację.
Zmierz szerokości dwóch sąsiednich pików na chromatogramie, zwracając uwagę, gdzie wartości na osi x znajdują się u podstawy każdego piku. Oś x reprezentuje czas retencji, zwykle mierzony w sekundach. Tak więc, jeśli szczyt zaczyna się w 15,1 sekundy i kończy w 18,5 sekundy, jego szerokość wynosi (18,5 - 15,1) = 3,4 sekundy.
Określ czasy retencji, notując czas, tj. położenie na osi x, które odpowiada położeniu maksimów pików. Ta wartość będzie zwykle znajdować się w połowie odległości między dwiema wartościami użytymi do obliczenia szerokości w kroku 1. Przykład podany w kroku 1 wykazywałby na przykład maksimum przy około 16,8 sekundy.
Oblicz rozdzielczość R między dwoma pikami przez:
R=\frac{RT_1-RT_2}{0,5(W_1+W_2)}
gdzie RT1 i RT2 reprezentują czasy retencji pików 1 i 2 oraz W1 i W2 reprezentują szerokości szczytów wziętych u ich podstaw. Kontynuując przykład z etapów 2 i 3, jeden pik wykazuje czas retencji 16,8 sekundy i szerokość 3,4 sekundy. Jeśli drugi pik wykazywałby czas retencji 21,4 sekundy przy szerokości 3,6 sekundy, to rozdzielczość byłaby:
R=\frac{21,4-16,8}{0,5(3,4+3,6)}=1,3
Rzeczy, których będziesz potrzebować
- Chromatogram HPLC
- Kalkulator