Elektroforeza żelowa to metoda stosowana w laboratoriach do rozdzielania DNA (kwas dezoksyrybonukleinowy). Może być również używany do oddzielania RNA i białek.
Odczytanie wyników elektroforezy żelowej pozwala naukowcom określić wielkość nici w próbce. Aby zrozumieć, jak działa ten proces, należy najpierw poznać definicję elektroforezy żelowej.
Definicja elektroforezy żelowej
Elektroforeza żelowa to potężne narzędzie stosowane w Biologia molekularna do określenia wielkości i ładunku elektrycznego DNA, RNA i białek. Zaczynasz od fragmentów DNA trawionych przez enzymy z większej nici DNA.
Używając intensywności pasma elektroforezy żelowej jako wyników, możesz określić rozmiar fragmentów. Można wtedy uzyskać Odcisk palca DNA.
Jak pokazuje część „elektro” słowa, a definicja elektroforezy żelowej pociąga za sobą użycie pola elektrycznego. Stosuje się specjalną maszynę, która zawiera roztwór buforowy pokrywający elektrody, studnię do zawieszania żelu i same elektrody.
Żel w elektroforezie żelowej
Elektroforeza żelowa
Żele agarozowe stworzyć porowatą matrycę, przez którą naładowane cząsteczki o różnych rozmiarach mogą przemieszczać się z różnymi prędkościami. Substancja chemiczna o nazwie bromek etydyny (EtBr) jest dodawana do roztworu żelu przed wlaniem go do formy.
Jeśli masz do oddzielenia bardzo małe cząsteczki DNA lub białka, może być konieczne użycie żel poliakrylamidowy zamiast agarozy. Zachowaj ostrożność podczas stosowania poliakrylamidu, ponieważ jest on neurotoksyczny.
Specjalny grzebień umieszcza się w formie żelu agarozowego, a następnie ostrożnie usuwa po jego zestaleniu. W tym miejscu umieszczany jest fragment DNA lub inne próbki molekularne, po uprzednim zmieszaniu ze specjalnym barwnikiem obciążającym. ładowanie barwnika jest tylko śledzenie ruchu DNA, ponieważ inaczej nie jest to widoczne.
Jest też studnia, w której znajduje się coś, co nazywa się a Drabina DNA lub znacznik. Służy jako wysokiej jakości szablon ze znanymi rozmiarami prążków do porównania rozmiaru z badanymi próbkami DNA. Po przyłożeniu pola elektrycznego te ujemnie naładowane cząsteczki będą przemieszczać się przez żel w kierunku dodatniego końca.
Wyniki elektroforezy żelowej
Gdy cząsteczki dotrą do końca żelu, nadszedł czas na czytanie wyniki elektroforezy żelowej. Barwnik EtBr w żelu łatwo wiąże się z DNA, stąd jego użycie, a następnie można zobaczyć prążki DNA fluoryzujące w świetle UV.
Musisz bardzo uważać, aby nie dotknąć bromku etydyny, ponieważ jego powinowactwo do DNA oznacza również, że może go rozwijać; dlatego jest uważany za mutagen. Nowsze, bezpieczniejsze barwniki są teraz dostępne, choć ich ceny są wyższe.
Światło UV ujawnia intensywność pasma elektroforezy żelowej DNA lub innych próbek molekularnych. Umiejscowienie prążków na żelu wskazuje na rozmiar fragment DNA. intensywność pasma elektroforezy żelowej ujawnia stężenie cząsteczki.
Teraz możesz porównać prążki DNA w twoich próbkach z próbką drabiny DNA. Znane rozmiary prążków drabiny pomogą ci określić względną wielkość badanego DNA.
Znaczenie wysokiej jakości elektroforezy żelowej
Elektroforeza żelowa została zastosowana w Pobieranie odcisków palców DNA i kryminalistyka. Pomogła naukowcom określić informacje o genomach wielu gatunków. Korzystanie z wysokiej jakości elektroforezy żelowej jest niezbędne w tych ważnych dziedzinach.
Dlatego tak ważne jest, aby pracować z wysokiej jakości składnikami i bardzo ostrożnie tworzyć żele. Niezbędne jest zapobieganie zanieczyszczeniu próbek DNA RNA lub białkami.
Upewnij się, że używasz czystego buforu, ostrożnie wlej żel, aby jego zagłębienia grzebieniowe były równomiernie uformowane i utrzymuj wszystkie odczynniki w odpowiedniej temperaturze. Elektroforeza żelowa intensywność prążka powinna być żywa i czysta, bez śladów innego DNA w tle i bez rozmazów RNA lub białek zanieczyszczających żel.