Å beregne titer for et virus er en komplisert måte å si at en forsker teller antall virus i et bestemt utvalg. For å beregne virustitere infiserer forskere plater med voksende bakterier med virusløsninger i varierende konsentrasjoner og finne ut antall virus i den opprinnelige løsningen ved å telle bakteriene som har dødd på grunn av viruset infeksjon.
Ta på deg hansker, fyll 10 ml rør med 9 ml buljong og merk dem "10 ^ -1", "10 ^ -2", "10 ^ -3", og så videre til “10 ^ -10.” Disse rørene vil bli brukt til virale seriefortynninger som brukes til å beregne fag titer. Siden virus kan vokse til utrolig høye konsentrasjoner, må du fortynne dem for å telle dem effektivt. Hvert rør representerer en ti ganger fortynning av viruset.
Ta 1 ml av den blandede kulturen fra røret merket "10 ^ -1" og overfør det med en ny pipette til neste rør, merket "10 ^ -2." Bland også dette røret.
Fortsett dette mønsteret for å lage en serie fortynningsserie. Du vil ende opp med 9 rør på 9 ml og 1 rør på 10 ml. Virusbelastningen i rørene dine blir fortynnet alt fra 10 ganger (ditt første rør) eller 100 ganger (ditt andre rør) til ti milliarder ganger (ditt siste rør).
Tilsett to dråper bakteriekultur i agaren og bland den forsiktig. Dette er bakteriene som vil bli drept, slik at du kan telle antall viruspartikler i en bestemt løsning.
Tilsett 1 ml av hver seriefortynning til det tilsvarende agarrøret mens rørene fremdeles er i varmtvannsbadet. For eksempel skal 1 ml av din 10 ^ -1 seriefortynning gå i agarrøret merket "10 ^ -1."
Bland hvert rør og hell deretter hvert rør i petriskålen med tilsvarende etikett. Dette vil skape et tynt lag med agar som har blitt inokulert med bakterier og virus i hver plate. La platene vokse over natten i en inkubator.
Ta platene ut av inkubatoren og undersøk dem. Du bør se overskyede områder over hele platen der bakterier har vokst, bortsett fra små klare flekker som kalles plakk. Disse plakettene er flekker av døde bakterier, og hver plakett representerer ett virus.
Ta antall plaketter på tallerkenen og multipliser med 10. Hvis du telte 157 plaketter, ville du fått 1570.
Multipliser tallet du fikk i forrige trinn med det inverse av tallet på fortynningsrøret. For eksempel, hvis platen du valgte var 10 ^ -5-platen, ville du multiplisere 1570 med 10 ^ 5 for å få 157000000. Dette endelige tallet er din fagtiter, og representerer antall virus per ml av den opprinnelige kulturen.