Plott et diagram over produktkonsentrasjon kontra tid for dataene fra det enzymatiske analysens første prøverør. Merk: den horisontale aksen skal være "tid", og den vertikale aksen skal være "produktkonsentrasjon."
Beregn den lineære regresjonslinjen for datapunktene du planla i del 1, trinn 1. Mens Excel- og grafkalkulatorer enkelt kan bestemme denne lineære modellen, kan du utlede et estimat for regresjonen linjens skråning ved å dele forskjellen i produktkonsentrasjon mellom tilstøtende datapunkter med deres tidsforskjell.
Registrer hellingen til den lineære regresjonslinjen fra seksjon 1, trinn 2 som "initial reaksjonshastighet (Vo)." Merk: i regresjonslinjemodellen "[produktkonsentrasjon] = m [tid] + b," er koeffisienten "m" skråningen.
Gjenta trinn 1, 2 og 3 for resten av reagensglassene i analysen.
Plott det motsatte av substratkonsentrasjonen for hvert reagensrør kontra omvendt av dets opprinnelige reaksjonshastighet (fra avsnitt 1, trinn 4). For eksempel hvis starthastigheten for et prøverør med en innledende substratkonsentrasjon på 50 mikromolar (uM) var 80 uM / s, inversene ville være 1/50 uM for substratkonsentrasjonen og 1/80 uM / s for den første hastighet. Merk: den inverse substratkonsentrasjonen skal være på den horisontale aksen, og den inverse starthastigheten skal være på den vertikale aksen.
Merk: substratkonsentrasjon bør være på den horisontale aksen, og den første reaksjonshastigheten skal være på den vertikale aksen.
Bestem den lineære regresjonslinjen for diagrammet du tegnet i del 2, trinn 1. Merk: fordi du trenger å kjenne y-krysset for regresjonslinjen, bør du angi punktene fra Seksjon 2, trinn 1 i enten Excel eller en grafkalkulator og bruk den innebygde regresjonsmodelleringen funksjonalitet.
Del 1 av y-krysset fra den lineære regresjonslinjen. Dette vil gi deg verdien av det inverse av Vmax, den maksimale reaksjonshastigheten for enzymet. Merk: hvis den lineære regresjonsmodellen har formen "[Inverse Vo] = m [Inverse Substrate Conc.] + B", vil verdien av "b" være y-skjæringspunktet. Del 1 med "b" for å beregne det inverse av Vmax.
Del 1 med resultatet fra seksjon 2, trinn 3 for å beregne den faktiske verdien av Vmax.
Bestem konsentrasjonen av enzymet i den opprinnelige analysen (se rådata). Merk: Enzymkonsentrasjonen er den samme for alle prøverørene; bare substratkonsentrasjonene varierer i analysen.
Del Vmax (fra seksjon 2, trinn 4) med enzymkonsentrasjonen (fra seksjon 2, trinn 5). Resultatet er verdien av Kcat.
En Chicago-basert tekstforfatter, Andy Pasquesi, har lang erfaring med å skrive for bilindustrien (BMW, MINI Cooper, Harley-Davidson), finansielle tjenester (Ivy Funds, William Blair, T. Rowe Price, CME Group), helsetjenester (Abbott) og forbruksvarer (Sony, Motorola, Knoll). Han har en Bachelor of Arts på engelsk fra Harvard University, men bryr seg ikke om Oxford-kommaet.