Viruso titro apskaičiavimas yra sudėtingas būdas pasakyti, kad mokslininkas skaičiuoja virusų skaičių konkrečiame mėginyje. Norėdami apskaičiuoti viruso titrus, mokslininkai augančių bakterijų plokšteles užkrėsto skirtingomis koncentracijomis virusiniais tirpalais ir apskaičiuokite virusų skaičių pradiniame tirpale, suskaičiuodami bakterijas, kurios mirė dėl viruso infekcija.
Užsimaukite pirštines, užpildykite 10 kultūros mėgintuvėlių 9 ml sultinio ir pažymėkite juos „10 ^ -1“, „10 ^ -2“, „10 ^ -3“ ir taip iki „10 ^ -10“. Šie mėgintuvėliai bus naudojami virusų serijiniams skiedimams, naudojamiems fagui apskaičiuoti titras. Kadangi virusai gali išaugti iki neįtikėtinai didelės koncentracijos, turite juos skiesti, kad galėtumėte veiksmingai suskaičiuoti. Kiekvienas mėgintuvėlis rodo dešimteriopą viruso praskiedimą.
Iš mėgintuvėlio, pažymėto „10 ^ -1“, paimkite 1 ml mišrios kultūros ir nauja pipete perkelkite į kitą mėgintuvėlį, pažymėtą „10 ^ -2“. Taip pat sumaišykite šį mėgintuvėlį.
Tęskite šį modelį, kad sukurtumėte serijinio skiedimo seriją. Galų gale gausite 9 mėgintuvėlius po 9 ml ir vieną mėgintuvėlį po 10 ml. Jūsų mėgintuvėlių virusinės apkrovos bus praskiestos nuo 10 kartų (jūsų pirmasis mėgintuvėlis) arba 100 kartų (jūsų antrasis mėgintuvėlis) iki dešimties milijardų kartų (jūsų paskutinis mėgintuvėlis).
Įlašinkite du lašus bakterijų kultūros į savo agarą ir atsargiai sumaišykite. Tai bakterijos, kurios bus sunaikintos, leidžiančios suskaičiuoti viruso dalelių skaičių konkrečiame tirpale.
Kol mėgintuvėliai vis dar yra karšto vandens vonelėje, įpilkite 1 ml kiekvieno serijinio praskiedimo į atitinkamą agaro mėgintuvėlį. Pvz., 1 ml 10 ^ -1 serijinio skiedimo turėtų patekti į agaro mėgintuvėlį, pažymėtą „10 ^ -1“.
Sumaišykite kiekvieną mėgintuvėlį ir supilkite kiekvieną mėgintuvėlį į Petri plokštelę su atitinkama etikete. Tai sukurs ploną agaro sluoksnį, į kurį buvo įskiepytos bakterijos ir virusai kiekvienoje plokštelėje. Leiskite plokštėms per naktį augti inkubatoriuje.
Išimkite plokšteles iš inkubatoriaus ir apžiūrėkite. Visoje plokštelėje, kurioje išaugo bakterijos, turėtumėte pamatyti drumstas vietas, išskyrus mažas aiškias dėmes, vadinamąsias plokštelėmis. Šios plokštelės yra negyvų bakterijų dėmės, ir kiekviena plokštelė reiškia vieną virusą.
Paimkite plokštelių skaičių lėkštėje ir padauginkite iš 10. Jei suskaičiuotumėte 157 plokšteles, gautumėte 1570.
Padauginkite ankstesniame žingsnyje gautą skaičių iš atvirkštinio skaičiaus ant skiedimo mėgintuvėlio. Pavyzdžiui, jei pasirinkta plokštelė buvo 10 ^ -5 plokštelė, padaugintumėte 1570 iš 10 ^ 5, kad gautumėte 157000000. Šis galutinis skaičius yra jūsų fago titras ir nurodo virusų skaičių 1 ml jūsų pradinės kultūros.