Sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)는 용액에서 단백질을 식별하는 생화학 적 방법입니다. Mathews 등이 "Biochemistry"에서 설명한 것처럼 단백질 샘플은 먼저 폴리 아크릴 아미드 겔 블록의 한쪽 끝에있는 "웰"또는 구멍에로드됩니다. 그런 다음 전기장이 젤에 적용됩니다. 로드 된 샘플에 추가 된 SDS는 단백질의 자연 전하를 무효화합니다. 이러한 이유로 단백질 분자량만으로도 젤을 통해 양전하를 띤 극을 향해 이동할 때 단백질의 이동 속도가 결정된다고 Bitesize Bio는 말합니다. 따라서 동일한 샘플의 여러 단백질이 서로 분리되어 다른 위치로 이동합니다.
젤 사진의 방향을 정하십시오. "상단"은 샘플이 원래 추가 된 우물의 위치입니다. "Bottom"은 샘플이 이동하는 곳이며 대부분의 경우 샘플의 이동하는 앞면을 나타내는 염료 앞면을 포함합니다. 왼쪽 또는 오른쪽에는 예측 가능한 분자량 가이드로 사용되는 "마커"가 있어야합니다.
각 레인의 샘플에 레이블을 지정합니다. 상단을 가로 질러 우물에 추가 된 샘플은 "레인"에서 수직으로 마이그레이션됩니다. 따라서 세로 열에 표시되는 모든 막대는 바로 위에로드 된 하나의 샘플에서 가져온 것입니다. 기둥을 시각화하기 어려운 경우 눈금자와 펜을 사용하여 차선에 테두리를 두십시오.
마커 레인에서 밴드의 분자 크기를 표시합니다. 시판되는 마커에는 각 밴드의 분자량과 함께 예상되는 밴드 패턴의 그림이 함께 제공됩니다. 밴드는 실제로 젤에 묻혀있는 염색 된 단백질 인 어두운 수평선 "막대"입니다.
각 마커 밴드에서 젤의 반대쪽 가장자리까지 확장되는 밝은 수평선을 그립니다. 이 선을 우물과 염료 전면에 평행하게 만들도록주의하십시오. 이 선은 각 마커 밴드로 표시된 분자량의 단백질이 각 레인에 위치 할 위치를 나타냅니다. 예를 들어, 25 킬로 달톤에서 연장 된 선 바로 아래에있는 4 번 레인의 밴드 마커 밴드는 레인 4 밴드가 분자에서 거의 25 킬로 달톤은 아니지만 무게.
각 레인의 각 밴드에 예상 분자량을 표시합니다. 마커를 가이드로 사용하고 마커 크기 간의 값을 추정합니다.
젤 사진 아래에 각 레인에 대한 "단백질"목록을 만드십시오. 기원이나 조건과 같이 각 샘플에 대해 알려진 내용을 설명하는 것으로 시작합니다. 그런 다음 레인에있는 각 밴드의 예상 분자량을 나열합니다. 하나의 밴드가있는 레인은 샘플에 단백질이 하나만 포함되어 있음을 나타냅니다. 다중 밴드가있는 레인은 다중 단백질의 존재를 나타냅니다. 마이그레이션 전선으로 실행되는 밴드는 가장 가까운 마커에서 제안한 것보다 작으며 마커가 나타내는 "보다 작음"을 제외하고는 예측할 수 없습니다.
단백질 목록에서 이상한 점을 확인하십시오. "번짐"모양은 너무 많은 단백질이 존재하거나 샘플의 점도가 이동에 영향을 미친다는 것을 나타낼 수 있습니다. 차선의 가장자리 또는 다른 밴드에 비해 상당히 큰 경우 해당 단백질의 농도가 너무 높을 수 있으므로 향후 희석해야합니다. 전기 영동. 차선 전체에 회색 빛이 도는 색조는 배경 젤 색상보다 어둡고 구별 할 수없는 단백질 조각을 나타냅니다.
각 레인에서 단백질의 정체성을 결정합니다. 이것은 분자량만을 사용하여 수행되지만 각 레인의 출처도 단서를 나타낼 수 있습니다. 일부 조건에서 단백질은 젤에서 이량 체 또는 삼량 체 결합을 유지할 수 있습니다. 따라서 하나의 단백질이 젤에 세 개의 별개의 밴드로 나타날 수 있습니다. 단백질을 식별 할 수 없더라도 밴드의 상대적인 어두움은 용액 내 단백질의 농도를 의미 할 수 있습니다. 궁금하고 알려지지 않은 모든 단백질은 원래 젤에서 직접 분리하여 식별을 위해 보낼 수 있습니다.
필요한 것
- 염색 된 SDS-PAGE 젤 사진
- 사용 된 분자량 마커의 키
- 지배자
- 펜