スプーリング法によるDNA抽出

DNA

デオキシリボ核酸とタンパク質。 DNAは遺伝子と呼ばれる単位に編成され、それぞれが特定のRNAまたはタンパク質配列をコードします。 遺伝子は、生物学的構造と機能、進化、病気、および生命システムの他の多くの側面について学ぶために研究されています。 遺伝子を詳細に研究するには、目的の細胞からDNAを単離および精製する必要があります。

DNA抽出

単一の細胞からDNAを抽出して研究することはできますが、肉眼で見るだけでは十分ではありません。 スプーリングに十分な量を取得するには、より多くのセルを処理する必要があります(数百万)。

正確なプロトコルは、特定のサンプルの固有の特性を説明するために大幅に異なりますが、一般的な手順は、均質化、溶解、消化、分離、および収集です。 手順は、小さな(サンプルのサイズに応じて)ガラスまたはプラスチックのチューブで行うのが最適です。

サンプルは通常、細胞を互いに完全に分離するためにブレンドまたは粉砕されます。 これにより、細胞成分が後続の試薬にアクセスしやすくなります。 次に、洗浄剤または酵素をホモジネートに添加して、細胞膜(および細胞が真核生物の場合は核膜)を溶解して、DNAを遊離させます。 この時点で、DNAはタンパク質、脂質、炭水化物など、細胞に含まれていたすべてのものに囲まれています。

タンパク質を分解してDNAに結合せず、その収集を妨げないようにするには、さらに酵素消化が必要になる場合があります。 DNAは、冷アルコール、純粋アルコール、エチルアルコール、またはイソプロピルアルコールを加えることにより、残りの細胞内容物から分離されます。 DNAはこれらのアルコールに溶けないので、アルコールとの接触を最小限に抑えるように凝縮します。 次に、凝縮したDNAは、通常は遠心分離またはスプーリングによって収集されます。

DNAスプーリング

スプーリングによるDNAの収集は、抽出手順から大量のDNAが得られる場合に効果的です。 純粋なDNAの印象的なもつれがはっきりと見えるので、これは優れたデモンストレーション方法でもあります。

DNAをスプールするには、分離ステップを慎重に実行する必要があります。 以前に添加した溶解試薬混合物の一部ではなかった場合は、アルコール添加ステップの前に、濃縮塩溶液(塩化ナトリウム)を溶液に添加する必要があります。 冷たいアルコールを試験管の側面にゆっくりと注ぎ、水溶液の上に層を形成し、混合を避けます。 正しく行われた場合、アルコールは塩辛い層の上に独自の層を形成します。 次に、スプ​​ーリングが発生します。

instagram story viewer

塩辛い層からDNAを収集するには、ガラス製の攪拌棒をアルコール層にチューブの底に触れるまで注意深く配置します。 2つの層の間の境界面を見ながら、指の間でロッドをゆっくりと回転させます。 十分な量のDNAが存在する場合、それは層間の界面で凝集して乳白色の半透明の塊を形成します。 ロッドを回転させてDNAをその周り(つまりスプーリング部分)に巻き付け、チューブから引き出します。 DNAは、保存またはさらなる分析のために、純粋なアルコールの別のチューブに移すことができます。

Teachs.ru
  • シェア
instagram viewer