科学者はフローサイトメトリーを使用して、さまざまな種類の細胞や微生物を区別します。 これは、医療診断や法医病理学などの多くのアプリケーションで使用されるツールです。 この実験手法はかなり簡単に実行できますが、複雑なデータの分析によって生成されます フローサイトメーターによるものは、複数の実験的要因および/またはサイトメーターのために、より困難です パラメーター。 そのため、CELLQuestやFlowJoなどの高度な専門プログラムを使用してサイトメトリーデータを視覚化および分析することは日常茶飯事です。 これらによって生成される結果を理解するには、フローサイトメトリー技術、機械、およびソフトウェアに精通している必要があります。 実験。
「調査中の質問や仮説は何でしたか？」と尋ねて、実験の目的を明確にします。 これは次のようになります 統計的サイトメトリーを使用してさらに分析するために、生の結果を適切な形式と設定に調整する必要があります ソフトウェア。 関連する設定でデータを表示するために必要な変更を加えます（例：ポジティブセル、ネガティブゲート、蛍光強度、細胞集団など）。
ゲートを見つけます。 セルは、密度プロットまたは等高線図上でグループ化するか、単にクラスター化して観察することができます。 多くの場合、グループはアイデンティティに応じて分離します。 あるグループが特定のマーカーまたは抗体を非常に強く染色する場合、そのグループのメンバーはすべて、そのマーカーを発現する特定の細胞型の同一性を持っていると結論付けられます。 これらのマーカーの複数に陽性である細胞を見つけることは一般的であり、これらの細胞は通常中間であり、「二重陽性」として示されます。
スキャッタグラフを見てください。 散布図でセルのグループが広がる方法は、セルのサイズを示します。 散乱が非常に大きいまたは大きいセルは、通常、大きなセルです。 ただし、細胞質の割合が高いという理由だけで大きい場合もあれば、核が非常に大きいために大きい場合もあります。 もちろん、調査対象の生物学に応じて、これは実験間で大きく異なります。
数字を見てください。 プロットを調整して、Y軸のカウントを維持しながら、1つの軸（通常はX軸）にさまざまなパラメーターを表示します。 これは、その特定のパラメーターに対して正であるサンプル母集団の割合を次のように示します。 ピークは通常、ポジティブ染色されたサンプルで観察されますが、ネガティブコントロールには存在しません。 サンプル。
複数パラメータのヒストグラムを見てください。 X軸とY軸をそれぞれに調整することにより、 実験中に調査することで、特性をより深く理解することができます。 サンプルの。 たとえば、X軸を赤色蛍光に設定し、Y軸を緑色蛍光に設定することにより、象限スタイルのゲートを計算できます。 細胞が存在し、赤または緑の蛍光、両方の色、またはなしで染色されている象限の4つの領域を示すサンプル すべて。 これにより、異種サンプルをその構成要素に分割し、重複するエンティティを視覚化および定量化することができます。
参考文献
- 「フローサイトメトリーデータの分析」; スーザンシャロー; 1991
- 「フローサイトメトリー：機器とデータ分析」; マーヴィンヴァンディラ; 1985
- 「フローサイトメトリープロトコル」; テレサとロバート・ホーリー; 2004
著者について
Palmer Owyoungは、カリフォルニア大学サンディエゴ校で国際ビジネスの修士号を取得しています。 カリフォルニア大学サンタバーバラ校で社会学の学士号を取得し、分子の訓練を受けています。 生物学者。 彼は2006年からフリーランスのライターを務めています。 執筆に加えて、彼はフルタイムの外国為替トレーダーおよびインターネットマーケターです。
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水玉RF /水玉/ゲッティイメージズ