トリス、またはトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンは、DNA抽出プロセス全体で使用される一般的な生物学的バッファーです。 任意の数のソースからの抽出中、DNAはpHに敏感です。 細胞溶解、不要な細胞成分の除去、沈殿の間、トリスは安定したpHを維持するために使用されます。 さらに、それは細胞溶解において特に重要な役割を果たします。
TL; DR(長すぎる; 読んでいない)
DNA抽出はpHに敏感なプロセスであり、トリス緩衝液を使用すると、細胞の溶解と抽出の間、pHを安定に保つのに役立ちます。
バッファーとしてのトリス
pHは多くの細胞因子に影響を及ぼし、影響を受ける可能性があるため、安定したpHを維持することは実験科学にとって不可欠です。 トリスのような生物学的緩衝液は、pHをシフトさせる可能性のある影響にもかかわらず、安定したpHを維持できるため重要です。 pKaが8.1のトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンは、pH 7〜9の効果的なバッファーです。 その中性範囲のため、トリスは生物学実験室で一般的に使用されるバッファーです。 ただし、トリス緩衝液は温度に敏感であり、不正確さを避けるために元々pHが設定された温度で使用する必要があります。
細胞の溶解
溶解、または細胞を破壊することは、DNA抽出の最初のステップです。 これは、トリスとEDTA(エチレンジアミン四酢酸)を含むバッファーによって実現されます。 EDTAは、カルシウムやマグネシウムなどの2価の陽イオンに結合します。 これらのイオンは細胞膜の完全性を維持するのに役立つため、EDTAでそれらを除去すると膜が不安定になります。 Trisは主要なバッファリングコンポーネントです。 その主な役割は、バッファーのpHを安定したポイント(通常は8.0)に維持することです。 さらに、トリス 膜内のLPS(リポ多糖)と相互作用し、膜を不安定にする働きをする可能性があります さらに。
TrisはDNAをpHシフトから保護します
細胞が分解されると、それらのDNAと内容物がバッファーにこぼれます。 さらに、RNase A(RNAを破壊する)、プロテアーゼ(タンパク質を破壊する)、およびSDS(ドデシル硫酸ナトリウム、膜断片を可溶化する)が含まれることがよくあります。 まとめると、この細胞内容物と断片化されたRNAおよびタンパク質のスープは、溶液のpHに大きな影響を与える可能性があります。 DNAはpHに敏感であるため、トリスがスープを緩衝し、pHを一定に保つことが重要です。
DNA沈殿
DNA抽出の最終段階では、DNA自体が溶液から抽出されます。 この時点で、DNAはバッファーに可溶です。 溶液から抽出するには、エタノールまたはイソプロパノール(イソプロピルアルコール)を添加してDNAを不溶性にします。 これが行われると、DNAは溶液中で白い糸状の物質として明らかになります。 この方法で残りの細胞成分からDNAを単離することはできますが、不溶性の場合は「使用」できません。 分離後、アルコールは除去され、使用するにはDNAをトリスなどの生物学的バッファーに戻す必要があります。
自分でやれ
DNAの抽出は、一般的に研究室で行われていますが、一般的には、 市販のキットで、一般的な家庭用品とグリーンを使用して、誰でも自宅でDNA抽出を行うことができます エンドウ豆またはほうれん草。 この場合、pHシフトからDNAを保護するためのトリスも生物学的バッファーも存在しません。 しかし、それは学生が細胞のDNAとつながるのを助ける視覚的な方法です。