バクテリアはペトリ皿でバクテリア寒天と呼ばれる固形培地上で増殖し、そこで隆起した円形のコロニーが形成されます。 個々の細菌細胞とは異なり、コロニーは肉眼で見えるのに十分な大きさの細菌のグループです。 細菌の増殖は、コロニーの数を簡単に観察することで測定できます。 ただし、より定量的な方法には、カウントチャンバーの使用、またはより多くの場合、実行可能なプレートカウントが含まれます。 後者は、さまざまな成長条件の影響などの定性的な情報も提供するため、最も頻繁に使用されます。 ペトリ皿には数十億のバクテリアが含まれている可能性があるため、最初に測定するには、コロニーの数を数えることができるようにサンプルを希釈する必要があります。
試験管で、10マイクロリットルの開始細菌培養物を90マイクロリットルの希釈培地に加えます。 チューブの蓋をしっかりと閉め、穏やかにボルテックスして均一な混合物を得ます。 これで、サンプルは元の濃度の10分の1になります。
この新しいサンプル10マイクロリットルを90マイクロリットルの希釈培地を含む新しい試験管に移し、再度混合します。 繰り返しになりますが、結果はサンプルがさらに希釈され、元の濃度の100分の1になります。 元のサンプルが10の間で希釈されるまで、これを数回繰り返します。4 および1010 回。 各チューブに正しい希釈、たとえば10のラベルが付いていることを確認します-1, 10-2 等々。
完了した最後の希釈液の10マイクロリットルを寒天プレートに分注します。 拡散エッジを使用して、寒天プレートの表面全体に細菌溶液を分配します。 さらに2枚のプレートについてこれを繰り返します。 比較のために、他のレベルの希釈でこれらのステップを実行することも一般的です。 プレートの底にラベルを付けてください。 各プレートの蓋を元に戻し、炎の下の実験台またはインキュベーターのいずれかで寒天プレートを数分間乾燥させます。 細菌株に適した温度に設定する必要があるインキュベーターにプレートを置きます。 12〜16時間成長させます。
コロニーは16時間後に見えるはずです。 ただし、一部の遺伝子組み換えには、より長い時間がかかる場合があります（たとえば、発色）。 コロニーが観察できたら、プレートを取り出して、30〜300個のコロニーがあるものを見つけます。 油性ペンを使用して、ペトリ皿の底（蓋ではなく寒天のある側）に、寒天を通してコロニーが見えるところにドットを置きます。 各マーカードットを数えます。 皿ごとに繰り返します。
この実験の開始培養物中の細菌の量を測定するには、計算で2か所で希釈を逆にする必要があります。 まず、試験管から1マイクロリットルを取り出してペトリ皿に入れると、希釈したサンプルの10分の1を取り出したので、それを逆にするには、すべてに10を掛ける必要があります。 また、試験管内の希釈率が例えば10の場合-7、次にコロニーの数に10を掛ける必要があります7 希釈効果を逆転させるために。 計算の指数から負の符号を削除するだけです。 次の式を使用します。
[カウントされたコロニーの数]×10×[元の濃度に到達するためにサンプルを何回乗算する必要があるか：たとえば、105] =開始培養1ミリリットルあたりのコロニー形成単位（CFU）の数。 これはあなたのペトリ皿のバクテリアの成長です。