溶解緩衝液の成分

Lyseはギリシャ語に由来する単語で、単に「分割する」または「破裂する」という意味です。 溶解緩衝液中の細胞に何が起こるかに関係します。溶解緩衝液は、細胞を破壊して細胞を抽出する溶液です。 内容。 科学者は、特に細菌の場合、分析のために細胞からDNAまたはタンパク質を抽出するときに溶解緩衝液を使用します。 細胞溶解バッファーの種類は実験の種類によって異なりますが、一般的な選択肢は次のとおりです。

TL; DR（長すぎる; 読んでいない）

溶解バッファーは、開いている細胞を破壊するのに役立つため、その内容にアクセスしたり、削除したりできます。 いくつかの例には、塩、洗剤、キレート剤と抑制剤、およびいくつかのアルカリ性化学物質が含まれます。

細胞が分裂する間、緩衝液はpHを安定させます。 Tris-HCLは、pH8で緩衝するための最も一般的な化学物質の1つです。 HEPESは、これらの実験におけるもう1つの一般的な緩衝化学物質です。 塩化ナトリウム塩はまた、イオン強度、つまり細胞外の溶質の総濃度を上昇させる可能性があります。 水は溶質濃度の低い領域から溶質濃度の高い領域まで細胞膜を横切って拡散する可能性があるため、この最後の点はある程度重要です。

洗剤は細胞膜を溶解するので、細胞の内容物が逃げることができます。 持つ両親媒性の分子構造（つまり、一方の端が水分子と容易に相互作用する一方で、もう一方の疎水性または「水を恐れる」端は相互作用しない分子）。 それらは、界面活性剤分子の疎水性テールが脂肪分子に向かって内側を向くミセル、小さなクラスターを形成することによって脂肪を溶解することができます。 一般的な界面活性剤には、ドデシル硫酸ナトリウム、またはSDS、NP-40、およびtritonXが含まれます。

溶解緩衝液には、通常、エチレンジアミン四酢酸（EDTA）やエチレングリコール四酢酸（EGTA）などのキレート剤も含まれます。 これらの化学物質は、2つの正電荷（マグネシウムとカルシウムなど）で金属イオンに結合するため、他の反応に使用できなくなります。 多くのDNAse（DNAを噛み砕くタンパク質）とプロテアーゼ（他のタンパク質をスライスするタンパク質）は、マグネシウムイオンを必要とします 機能、したがって、この重要な成分を彼らから奪うことによって、EDTAとEGTAはプロテアーゼまたはDNAseのレベルを下げるのを助けます アクティビティ。 しかし、彼らはそれを完全に排除するわけではなく、いくつかのプロテアーゼはマグネシウム補因子に依存しないので、溶解緩衝液 プロテアーゼ阻害剤と呼ばれる、プロテアーゼに結合して機能を妨げる化学物質が含まれることもあります。 正しく。

細菌からプラスミドを精製するための非常に一般的な技術であるアルカリ溶解には、3つの解決策が含まれます。 最初のものには、グルコース、トリス-HCLバッファー、EDTA、およびRNAsesが含まれています。 ブドウ糖はバクテリアの外側に高い溶質濃度を作り出すので、バクテリアは少したるんでなり、溶解しやすくなります。 EDTAとtris-HCLはすでに説明したように機能しますが、RNAseは細胞内のRNAを噛み砕いて、邪魔にならないようにします。 2番目の解決策は実際に細胞を溶解します。 これにはSDS界面活性剤とNaOHが含まれており、pHを12以上に上げ、細胞内のタンパク質を変性させ、DNAを一本鎖に分離させます。 3番目の溶液には酢酸カリウムが含まれており、pHをより中性のレベルに戻し、プラスミドDNA鎖を元に戻すことができます。 その間に、変性したタンパク質が凝集して沈殿し、ドデシル硫酸イオンが発生します カリウムイオンと一緒になって不溶性の化合物を形成し、これも溶液から沈殿します。