Kcatの計算方法

酵素アッセイの最初の試験管からのデータについて、生成物濃​​度対時間のチャートをプロットします。 注：横軸は「時間」、縦軸は「製品濃度」である必要があります。

セクション1、ステップ1でプロットしたデータポイントの線形回帰直線を計算します。 Excelとグラフ電卓はこの線形モデルを簡単に決定できますが、回帰の推定値を導き出すことができます 隣接するデータポイント間の生成物濃度の差を時間の差で割ることによる線の傾き。

セクション1、ステップ2の線形回帰直線の傾きを「初期反応速度（Vo）」として記録します。 注：回帰直線モデル「[製品濃度] = m [時間] + b」では、係数「m」は スロープ。

アッセイの残りの試験管について、ステップ1、2、および3を繰り返します。

各試験管の基質濃度の逆数とその初期反応速度の逆数をプロットします（セクション1、ステップ4から）。 たとえば、初期基質濃度が50マイクロモルの試験管の初速度の場合 （uM）は80 uM / sで、逆数は基質濃度の場合は1/50 uM、初期濃度の場合は1/80 uM / sになります。 速度。 注：逆基質濃度は横軸にあり、逆初速度は縦軸にある必要があります。

注：基質濃度は横軸に、初期反応速度は縦軸にある必要があります。

セクション2、ステップ1でプロットしたチャートの線形回帰直線を決定します。 注：回帰直線のy交点を知る必要があるため、次のポイントを入力する必要があります。 セクション2、ステップ1をExcelまたはグラフ電卓に入力し、組み込みの回帰モデリングを使用します 機能。

1を線形回帰直線からのy交点で割ります。 これにより、酵素の最大反応速度であるVmaxの逆数の値が得られます。 注：線形回帰モデルが「[InverseVo] = m [Inverse SubstrateConc。] + b」の形式をとる場合、「b」の値はy交差になります。 1を「b」で割ってVmaxの逆数を計算します。

1をセクション2、ステップ3の結果で割って、Vmaxの実際の値を計算します。

元のアッセイで酵素の濃度を決定します（生データを参照）。 注：酵素濃度はすべての試験管で同じです。 アッセイでは基質濃度のみが異なります。

Vmax（セクション2、ステップ4から）を酵素濃度（セクション2、ステップ5から）で割ります。 結果はKcatの値です。