הסיבה להכתמת דגימה במיקרוסקופ

הסיבה העיקרית להכתמת דגימה לפני שמכניסים אותה למיקרוסקופ היא להסתכל עליה בצורה טובה יותר, אך צביעה עושה הרבה יותר מאשר פשוט להדגיש את קווי המתאר של התאים. כתמים מסוימים יכולים לחדור לדפנות התא ולהדגיש רכיבי תאים, וזה יכול לעזור למדענים לדמיין תהליכים מטבוליים. כתמים גם עוזרים להבחין בין תאים חיים לתאים מתים. יתר על כן, צביעה מאפשרת למדענים לספור את מספר התאים מסוג מסוים בתוך ביומסה מסוימת. עשרים או יותר סוגים שונים של כתמים קיימים, ולכל אחד מטרתו.

TL; DR (ארוך מדי; לא קרא)

המטרה העיקרית של מכתים היא הדגשת תאים וחלקי תאים. מעל 20 סוגים שונים של כתמים קיימים, וסוג הכתם בו אתה משתמש תלוי במה שאתה מחפש.

הבחירה בכתם תלויה במה שאתה מחפש. לא כל הכתמים מתאימים לתאים חיים, אך אלה כוללים חום ביסמרק, אדום טולואן, כחול הנילוס ואדום הנילוס, ופלואורסצנטים מסוימים המשמשים להדגשת DNA. חלק מהכתמים מדגישים נבגים, חלקם מזהים שומנים וחלבונים, וחלקם משנים את צבעם בנוכחות עמילנים. מטרת הבדיקה קובעת את סוג הכתם הטוב ביותר לשימוש. לדוגמא, רופא שעורך מריחת PAP ישתמש באאוזין Y. זהו צבע פלואורסצנטי חומצי שהופך לאדום כאשר הוא יוצר קשר עם תאי דם אדומים, ציטופלזמה וממברנות תאים. הוא משמש גם לבדיקת מוח דם.

במקרים מסוימים, חוקר עשוי להשתמש ביותר מכתם אחד. לדוגמא, המטוקסילין הוא כתם שהופך את גרעיני התאים לכחולים. כאשר משתמשים בשילוב עם אאוזין, שהופך את חלקי התא האחרים לאדומים או ורודים, הוא מספק ניגודיות חזקה יותר ומקל על הבחנה בין הגרעינים. קל יותר לבחון מריחות PAP ודגימות מוח דם כאשר משתמשים בשני הכתמים הללו יחד.

הכתם של גרם: עובדי בית החולים משתמשים בכתם של גרם כדי לזהות חיידקים מזיקים. זו למעשה סדרה של חומרי צבע שמשפיעים על סוגים שונים של חיידקים ומעניקים לרופאים כלי אבחון חשוב. הכתם של גרם הוא תהליך בן שלושה חלקים. בראשון נוסף סגול הקריסטל של האקר, שמכתים את כל החיידקים בצבע סגול אחיד. בשלב הבא מתווסף כתם יוד הגורם לדבקות הצבע בתאים חיוביים לגראם שהם בעיקר סטפילוקוקוס וסטרפטוקוקוס. הכתם נשטף ומשאיר את התאים החיוביים לגראם עם צבע סגול מובהק; ואז מציגים כתם שלישי, ספרנין O, כדי לשפר את הניגודיות בין החיידק הגראם-שלילי לשאר החומר בשקופית.

כשמכינים דגימה בשקופית, ניתן להרכיב אותה או להרכיב אותה רטובה, לחתוך אותה לחלק דק או למרוח אותה. כשמשתמשים בכתם, ההליך המקובל הוא להרכיב את הדגימה באופן רטוב, כלומר להניח טיפת מים על השקופית, להניח את הדגימה במים ולכסות אותה במגלשת כיסוי. לאחר מכן אתה מורח את הכתם בפינה של השקופית עם טפטפת ומאפשר למשוך אותו לעבר הדגימה על ידי פעולה נימית. זה עוזר לשים מגבת נייר בצד הנגדי של השקופית כדי למשוך את המים. לאחר שהכתם התפשט על פני השקופית כולה, הדגימה מוכנה לבדיקה.