חיידקים גדלים בתבשילי פטרי על גבי מדיום מוצק המכונה אגר חיידקי, בו נוצרות מושבות עגולות ומורמות. שלא כמו תא חיידקים בודד, מושבה היא קבוצה של חיידקים גדולים מספיק כדי להיראות בעין בלתי מזוינת. ניתן למדוד את צמיחת החיידקים על ידי תצפית פשוטה כמה מושבות קיימות; עם זאת, שיטות כמותיות יותר כוללות שימוש בתא ספירה, או לעתים קרובות יותר, ספירת צלחות קיימא. זה האחרון משמש בתדירות הגבוהה ביותר מכיוון שהוא גם מספק מידע איכותי כגון ההשפעה של תנאי גדילה משתנים. מכיוון שעלולים להיות מיליארדי חיידקים בצלחת פטרי, מדידה ראשונה מחייבת דילול הדגימה כך שניתן יהיה לספור את מספר המושבות.
במבחנה, הוסף 10 מיקרוליטר מתרבית החיידקים המתחילה ל 90 מיקרוליטר של מדיום דילול. סגרו היטב את מכסה הצינור וסחררו בעדינות כדי להשיג תערובת הומוגנית. כעת המדגם הוא עשירית מהריכוז המקורי שלו.
העבר 10 מיקרוליטר מהמדגם החדש למבחנה חדשה המכילה 90 מיקרוליטר של מדיום דילול, ערבב אותו שוב. שוב, התוצאה תהיה המדגם המדולל עוד יותר - כעת הוא יהיה מאית מהריכוז המקורי שלו. חזור על פעולה זו מספר פעמים, עד שהמדגם המקורי מדולל בין 104 ו -1010 פִּי. ודא שכל צינור מתויג עם דילול נכון, לדוגמא 10-1, 10-2 וכולי.
לוותר על 10 מיקרוליטר של הדילול האחרון שהושלם על צלחת האגר. בעזרת הקצה המתפשט, הפץ את תמיסת החיידקים על פני כל שטח צלחת האגר. חזור על כך לשתי צלחות נוספות. מקובל לבצע את השלבים הללו עם רמות דילול אחרות לשם השוואה. הקפד לתייג את תחתית הצלחות. החלף את המכסים על כל צלחת והניח ללוחות האגר להתייבש מספר דקות על ספסל מעבדה מתחת ללהבה, או בחממה. מניחים את הצלחות בחממה אשר יש להגדיר לטמפרטורה המתאימה לזן החיידקים. השאירו לגדול בין 12 ל -16 שעות.
מושבות צריכות להיות גלויות לאחר 16 שעות; עם זאת, כמה שינויים גנטיים עשויים לדרוש זמן רב יותר (למשל, פיתוח צבע). כאשר ניתן לצפות במושבות, הוצא את הצלחות ומצא כאלה שיש בהן בין 30 ל -300 מושבות. בעזרת סמן קבוע, הניחו נקודה בתחתית צלחת הפטרי - הצד עם האגר, ולא המכסה - בכל מקום בו מושבה נראית דרך האגר. ספרו כל נקודת סמן. חזור על כל מנה.
כדי למדוד את כמות החיידקים בתרבית ההתחלתית לניסוי זה, צריך להפוך את הדילול בחישובים, בשני מקומות. ראשית, כשלקחת מיקרוליטר אחד ממבחנה כדי להכניס את צלחת הפטרי, לקחת עשירית מהמדגם המדולל, אז עליך להכפיל הכל ב -10 כדי להפוך את זה. בנוסף, אם גורם הדילול במבחנה היה, למשל, 10-7, אז יש להכפיל את מספר המושבות ב -107 על מנת להפוך את אפקט הדילול. פשוט הסר את הסימן השלילי מהמערך בחישובים. השתמש בנוסחה:
[מספר המושבות שנספרו] × 10 × [כמה פעמים יש להכפיל את הדגימה כדי להגיע לריכוז המקורי: למשל, 105] = מספר יחידות המושבה (CFU) למיליליטר תרבות מתחילה. זהו גידול החיידקים בצלחות הפטרי שלך.
