כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC) היא טכניקת מעבדה המשמשת להפרדה ולזיהוי תרכובות. זהו סוג של כרומטוגרפיית עמודים הנשענת על קוטביות שונות של תרכובות בתמיסה על מנת להפריד ביניהן. HPLC שונה מכרומטוגרפיית עמוד רגילה מכיוון שהיא משתמשת בלחץ בכדי לכפות את הפתרון דרך העמודה במהירות רבה יותר, ולכן היא מייצרת תוצאות מהירות יותר, ולעיתים מדויקות יותר. המטרה היא להפריד בין תרכובות בעמודה ולצאת מהן בנפרד.
בגלל מהירות ה- HPLC והיא מסתמכת על קוטביות שונה של תרכובות, שתי תרכובות עם מבנה וקוטביות דומים יכולים לצאת ממנגנון הכרומטוגרפיה באותו זמן או כמעט זהה זְמַן. זה ידוע בשם coelution. הקואליציה מקשה על קביעת איזו חלקה של התערובת שחולפת באיזו נקודה.
HPLC משתמש בדרך כלל בעמוד זכוכית מלא בחרוזים העשויים מחומרים שונים. בתערובות הנאלצות דרך העמוד יש כימיקלים הנקשרים בעוצמות שונות לחרוזים. חוזק הקישור, שתלוי בדמיון בקוטביות, קובע כמה זמן הכימיקל ייקשר לחרוז לפני שישתחרר. תרכובות מסוימות נקשרות בצורה כה חזקה, עד כי הן למעשה אינן משוחררות מהחרוזים בעמודה ולעולם אינן נמדדות בתמיסה היוצאת מהעמודה.
טכניקות הפרדה מעבדתיות אופייניות כוללות פיתוח assay, או שיטת הפרדה, ואז יישום assay זה כדי להפריד תרכובות בודדות מתמיסה. עם זאת בדרך כלל זה מביא למספר פתרונות שצריכים לעבור גם הליכים, מה שמוביל לעלייה מעריכית במורכבות. למרות שלעתים קרובות HPLC יכולה לפשט ולהאיץ את התהליך הזה, העלות של פיתוח מכשיר HPLC יכולה להיות אדירה. פיתוח מנגנון HPLC, למרות שהוא יעיל בהרבה, הוא הרבה יותר יקר מאשר פיתוח מבחנים אחרים להפרדת תרכובות. זה עושה את זה לא משתלם כלכלית עבור מעבדות קטנות רבות בבעלות פרטית.
HPLC משמש לא רק להפרדת תרכובות פשוטות, הוא משמש גם לבידוד חלבונים ספציפיים מתערובת תאית. במקרה זה החרוזים בעמוד מצופים בדרך כלל בנוגדן ספציפי לחלבון שעליך לאסוף. החלבונים קושרים את הנוגדנים והתמיסה הנותרת עוברת דרך העמודה, ואז החלבונים משתחררים באמצעות תמיסה אחרת ונאספים. לשם כך נדרש מטכנאי מיומן ביותר לפקח על העמודה בכל עת ולוודא כי התהליך פועל בדיוק כמתוכנן.