Ada banyak metode untuk memisahkan dan mengidentifikasi senyawa yang berbeda. Kromatografi adalah ilmu yang memungkinkan Anda untuk memisahkan komponen campuran. Itu Rf (kadang-kadang ditulis secara informal sebagai "nilai rf") adalah bagian dari itu.
Ada banyak jenis kromatografi. Di sini, fokusnya adalah jenis kromatografi paling sederhana: kromatografi kertas atau kromatografi lapis tipis (KLT). Keduanya menggunakan prosedur umum yang sama, yang dijelaskan di bawah ini.
Apa yang Terlibat dalam Kromatografi?
Semua jenis kromatografi memiliki fase diam dan fase gerak. Fase diam, seperti yang bisa Anda tebak dari namanya, tidak bergerak. Dalam kromatografi kertas, fase diam adalah kertas itu sendiri.
Untuk memulai pemisahan senyawa, zat yang akan dianalisis diteteskan pada tepi bawah kertas. Kemudian kertas ditempatkan dalam gelas kimia yang berisi fase gerak, yaitu pelarut. Pelarut harus berada di bawah titik di mana zat untuk analisis bertitik. Seharusnya tidak menenggelamkan analit.
Cairan bergerak ke atas kertas dengan aksi kapiler. Jika analit atau bagian dari analit ditarik ke fase gerak, ia akan bergerak bersamanya. Jika memiliki daya tarik yang lebih kuat untuk fase diam, itu tidak akan bergerak.
Setelah pelarut naik ke fase diam sampai batas tertentu, Anda memiliki kromatogram. Kromatogram ini memberi tahu Anda sesuatu tentang pemisahan berbagai komponen dalam campuran atau memberi tahu Anda tentang zat apa yang Anda miliki. Bagaimana?
Memisahkan dan Mengidentifikasi Komponen Menggunakan Kromatogram
Jika kondisi untuk mengembangkan kromatogram adalah sama, maka jarak perpindahan zat tertentu harus berubah. Jarak ini diukur dengan rumus faktor retensi atau Rf.
Rumus faktor retensi adalah:
Nilai ini harus sama untuk suatu zat bila kromatogram dikembangkan dengan cara yang sama.
Ini berguna ketika Anda memiliki campuran zat.
Misalnya, Anda memiliki empat sampel: Tiga adalah standar, dan satu adalah campuran. Tugas Anda adalah mengidentifikasi komponen mana yang ada dalam campuran.
Apa itu standar? Standar adalah sampel murni suatu zat. Ini dapat dijalankan pada kromatogram sebagai pembanding.
Campuran dapat dijalankan, setelah itu Anda dapat menentukan seberapa jauh komponen yang berbeda di dalamnya dijalankan.
Katakanlah Standar #1 memiliki afinitas yang kuat untuk air (fase gerak). Ini berarti bahwa ia akan melakukan perjalanan ke atas kertas dengan fase gerak. Standar #2 di sisi lain memiliki afinitas yang kuat untuk kertas. Ini berarti bahwa ia akan tetap dengan fase diam. Terakhir, Standar #3 memiliki afinitas untuk air dan kertas. Anda memperkirakan itu akan memindahkan jumlah menengah.
Anda menemukan bahwa pelarut bergerak 5,7 cm sementara Standar #1 bergerak 0,5 cm, Standar #2 bergerak 4,8 cm, dan Standar #3 bergerak 2,9 cm. Apa itu Rf nilai untuk setiap standar?
Sekarang, Anda tahu Rf nilai-nilai untuk standar. Selanjutnya, pada selembar kertas lain Anda menempatkan titik campuran dan biarkan kromatogram berkembang dengan menempatkannya di dalam air.
Setelah dihapus, Anda menemukan bahwa ada dua titik yang terpisah dari titik awal yang Anda tempatkan. Ini kemungkinan berarti bahwa hanya ada dua komponen dalam campuran Anda. Selanjutnya, Anda perlu mencari tahu standar mana yang sesuai dengan kedua komponen ini. Untuk melakukan ini, Anda mengukur Rf nilai-nilai.
Pelarut bergerak 4,5 cm. Satu komponen (disebut komponen 1) bergerak 2,2 cm, dan yang lainnya bergerak 3,9 cm (disebut komponen 2). Untuk melihat standar mana yang sesuai dengan komponen ini, Anda perlu menggunakan rumus faktor retensi untuk menghitung Rf nilai-nilai.
Mengingat R inif nilai, kemungkinan komponen 1 sesuai dengan Standar #3 karena Rf nilainya sangat mirip. Komponen 2 kemungkinan Standar #2.