La chromatographie liquide à haute performance (HPLC) est une technique de laboratoire utilisée pour séparer et identifier des composés. C'est un type de chromatographie sur colonne qui repose sur différentes polarités de composés dans une solution afin de les séparer. La HPLC diffère de la chromatographie sur colonne standard car elle utilise la pression pour forcer la solution à traverser la colonne plus rapidement et produit donc des résultats plus rapides et parfois plus précis. Le but est de séparer les composés dans la colonne et de les faire sortir séparément.
En raison de la vitesse de la HPLC et de sa dépendance à l'égard de différentes polarités de composés, deux composés avec une structure et des polarités similaires peuvent sortir de l'appareil de chromatographie en même temps ou presque au même moment temps. C'est ce qu'on appelle la coélution. La coélution rend difficile la détermination exacte de la portion du mélange éluée à quel moment.
La HPLC utilise généralement une colonne de verre remplie de billes faites de différents matériaux. Les mélanges forcés à travers la colonne contiennent des produits chimiques qui se lient avec des forces différentes aux billes. La force de la liaison, qui dépend de la similitude de polarité, détermine combien de temps le produit chimique se liera à la bille avant d'être libéré. Certains composés se lient si fortement qu'ils ne sont pratiquement jamais libérés des billes dans la colonne et ne sont jamais mesurés dans la solution sortant de la colonne.
Les techniques de séparation typiques en laboratoire impliquent le développement d'un essai, ou une méthode de séparation, puis la mise en œuvre de cet essai pour séparer les composés individuels d'une solution. Cependant, cela se traduit généralement par de multiples solutions qui doivent également subir des procédures, ce qui entraîne une augmentation exponentielle de la complexité. Bien que la HPLC puisse souvent simplifier et accélérer ce processus, le coût de développement d'un appareil HPLC peut devenir énorme. Le développement d'un appareil HPLC, bien que beaucoup plus efficace, est beaucoup plus coûteux que le développement d'autres tests pour séparer les composés. Cela le rend financièrement non viable pour de nombreux petits laboratoires privés.
La HPLC n'est pas seulement utilisée pour séparer des composés simples, elle est également utilisée pour isoler des protéines spécifiques d'un mélange cellulaire. Dans ce cas, les billes de la colonne sont généralement recouvertes d'un anticorps spécifique à la protéine que vous devez collecter. Les protéines se lient aux anticorps et la solution restante est passée à travers la colonne, puis les protéines sont libérées à l'aide d'une autre solution et collectées. Cela nécessite un technicien hautement qualifié pour surveiller la colonne à tout moment et s'assurer que le processus se déroule exactement comme prévu.