Les enzymes sont des protéines qui réduisent l'énergie d'activation dans les réactions chimiques sans être consommées dans la réaction. Biologiquement, les enzymes sont des molécules essentielles qui accélèrent les réactions dans les systèmes métaboliques. En conséquence, la cinétique enzymatique étudie la vitesse de réaction des enzymes dans divers contextes chimiques. De nombreux facteurs affectent la vitesse d'une enzyme. La concentration d'un substrat, la température, les inhibiteurs et le pH influencent le seuil d'une enzyme dans une réaction chimique. À l'aide de relations linéaires telles que le tracé de Lineweaver-Burk, vous pouvez trouver le taux maximum d'une enzyme.
Facilité de calcul de la Vmax dans le tracé de Lineweaver-Burk
Commencez par tracer l'équation de Michaelis-Menten pour obtenir une courbe d'hyperbole. Ensuite, utilisez la réciproque de l'équation de Michaelis-Menten pour obtenir une forme à l'origine de la pente de l'activité enzymatique. Ensuite, vous obtiendrez le taux d'activité enzymatique sous la forme 1/Vo = Km/Vmax (1/[S]) + 1/Vmax, où Vo est le taux initial, Km est le constante de dissociation entre le substrat et l'enzyme, Vmax est la vitesse maximale et S est la concentration de la substrat.
Étant donné que l'équation à l'origine de la pente relie le taux à la concentration du substrat, vous pouvez utiliser l'équation typique formule de y = mx + b, où y est la variable dépendante, m est la pente, x est la variable indépendante et b est la y-interception. Avant un logiciel informatique spécifique, vous utiliseriez du papier millimétré pour tracer la ligne. Maintenant, vous utilisez un logiciel de base de données typique pour tracer l'équation. Ainsi, connaissant le taux initial, Vo, et les différentes concentrations du substrat, vous pouvez créer une ligne droite. Le tracé linéaire représente la pente de Km/Vmax et l'ordonnée à l'origine de 1/Vmax. Ensuite, utilisez l'inverse de l'ordonnée à l'origine pour calculer la Vmax de l'activité enzymatique.
Utilisations pour le tracé de Lineweaver-Burk
Les inhibiteurs modifient le taux maximum de l'activité enzymatique principalement de deux manières: de manière compétitive et non compétitive. Un inhibiteur compétitif se lie au site d'activation d'une enzyme bloquant le substrat. De cette manière, l'inhibiteur entre en compétition avec le substrat pour se lier au site enzymatique. Permettre une concentration élevée de l'inhibiteur compétitif assure la liaison au site. Par conséquent, l'inhibiteur compétitif modifie la dynamique du taux enzymatique. Premièrement, l'inhibiteur modifie la pente et l'intersection en x Km créant une pente beaucoup plus raide. Cependant, le taux maximum, Vmax, reste le même.
D'autre part, un inhibiteur non compétitif se lie à un site différent du site d'activation de l'enzyme et n'entre pas en compétition avec le substrat. L'inhibiteur modifie les composants structurels du site d'activation empêchant le substrat ou une autre molécule de se lier au site. Ce changement a un impact sur l'affinité du substrat pour l'enzyme. Les inhibiteurs non compétitifs modifient la pente et l'ordonnée à l'origine du graphique de Lineweaver-Burk, diminuant la Vmax tout en augmentant l'ordonnée à l'origine avec une pente plus raide. Cependant, l'ordonnée à l'origine reste la même. Bien que le tracé Lineweaver-Burk soit utile à bien des égards, le tracé linéaire a des limites. Malheureusement, la parcelle commence à déformer les taux à des concentrations de substrat très élevées ou faibles, créant des extrapolations sur la parcelle.