Western blot -testi, jota kutsutaan myös immunoblottaukseksi, on testi spesifiselle proteiinille proteiiniseoksessa. Western blot -testi suoritetaan geelielektroforeesin tai entsyymiin liittyvän immunosorbenttimäärityksen (ELISA) testin jälkeen, ja se käyttää vasta-aineita spesifisten proteiinien tunnistamiseen.
Natriumdodekyylisulfaattipolyakryyliamidigeelielektroforeesi (SDS-PAGE) on yleinen testi, jota käytetään proteiinien erottamiseen käytettäväksi Western-blotissa. Proteiinit erotetaan painon ja sähköisten ominaisuuksien mukaan, kun ne liikkuvat geelimatriisin läpi.
ELISA-testi käyttää entsyymejä tai vasta-aineita, jotka on kiinnitetty kiinteään pintaan testipinnan luomiseksi. Sitten näyte lisätään testipinnalle. Proteiineihin reagoivat tai kiinnittyvät vasta-aineet tai entsyymit osoittavat positiivisen tuloksen.
Western-blot-testi suoritetaan geelielektroforeesin jälkeen. Erotetut proteiinit siirretään (tai blotataan) nitroselluloosa- tai nailonkalvoille ja tunnistetaan spesifisillä vasta-aineilla, jotka on merkitty sekundaarisella proteiinilla.
Western blot-testiä käytetään joko geelielektroforeesi- tai ELISA-testien positiivisten tulosten vahvistamiseen. Western blot -testi voi tunnistaa proteiinit tarkemmin ja sulkea pois väärät positiiviset tulokset.