La electroforesis en gel es un método utilizado en laboratorios para medir y clasificar hebras de ADN. Es necesario porque el ADN en condiciones normales es demasiado pequeño para manipularlo, incluso cuando se observa con la mayoría de los microscopios. El laboratorio de electroforesis en gel utiliza un procedimiento relativamente sencillo, y la misma técnica básica también se puede utilizar para separar proteínas individuales.
La matriz de gel
Para comenzar el procedimiento de electroforesis en gel, primero debe crear el gel. Por lo general, los geles se fabrican en láminas delgadas utilizando una sustancia llamada agarosa. La agarosa en polvo se coloca en un matraz, seguida de una solución de agua salada llamada tampón. Esta mezcla de agarosa y tampón se calienta hasta que las dos sustancias se funden, luego se vierte en un molde de formación. Luego se coloca un dispositivo llamado peine en un extremo del molde antes de que el gel se enfríe. Cuando el gel se enfría, se retira el peine, dejando pequeñas ranuras que se utilizarán para contener las muestras de ADN.
Una característica especial de la mezcla de agarosa enfriada (llamada matriz de gel) proviene del hecho de que se crea con agua salada. Cuando está electrificada, la matriz se volverá conductora, permitiendo que la electricidad fluya a lo largo de su longitud. Otra propiedad especial de la matriz de gel es la presencia de orificios microscópicos regulares. Estos orificios permitirán que las hebras de ADN viajen a través de la matriz de gel y facilitarán el proceso de clasificación.
La cámara de electroforesis
El siguiente paso es crear una cámara de electroforesis. Esta es una pequeña caja rectangular, cableada con una conexión eléctrica positiva y negativa en cada extremo. Las cámaras suelen ser poco profundas, lo suficientemente pequeñas como para caber en una mesa y están construidas con materiales transparentes como plexiglás.
Se vierte una solución de agua salada en el fondo de la cámara de electroforesis y la matriz de gel se sumerge ligeramente dentro de esta solución. El agua salada tiene dos propósitos: ayudar al flujo de electricidad y mantener húmeda la matriz del gel. Dado que el ADN es impulsado por una carga negativa, coloque su matriz de modo que sus muestras estén ubicadas junto a su conexión eléctrica negativa.
Preparando el ADN
Luego se preparan las muestras de ADN. Dado que el ADN en solución es casi imposible de ver, se agrega un agente colorante llamado tampón de carga a cada muestra individual. Este agente también espesa la solución de ADN, haciéndola menos líquida y más manejable. Con una pipeta, transfiera una muestra de solución de ADN a cada ranura alterna de la matriz de gel. En la ranura vacía entre cada muestra, coloque una solución de ADN cuya longitud ya conozca (llamada estándar de ADN) para el control y la comparación del experimento.
Conectar la alimentación
Ahora, encienda su cámara de electroforesis. Bajo energía negativa, sus muestras de ADN serán forzadas a lo largo de la cámara. Las pequeñas hebras de ADN se moverán más rápidamente a través de la matriz de gel y en poco tiempo se separarán de las hebras más largas y lentas. El tinte del agente colorante le permite seguir el rastro del ADN. No podrá ver hebras individuales de ADN, pero las hebras de la misma longitud se agruparán.
Pasos finales
Cuando se clasifica el ADN, la matriz se retira de la cámara de electroforesis. Luego, el ADN se tiñe para permitir una medición y un examen más fáciles.