Los científicos y los técnicos a menudo necesitan calcular la concentración de células en una suspensión. Por ejemplo, cuando a un paciente le extraen sangre en el consultorio de un médico, el laboratorio puede usar ciertos métodos para buscar la cantidad de glóbulos blancos en un volumen determinado de sangre. Esto le da al médico mucha información sobre la salud de su paciente, especialmente su sistema inmunológico y si está combatiendo una infección u otra enfermedad. Pruebas como esta pueden buscar muchas otras células en la sangre, así como en el líquido cefalorraquídeo y otros líquidos corporales, como el recuento de espermatozoides en el semen para fines de fertilidad. Los científicos también calculan las concentraciones celulares de bacterias, levaduras y otros microorganismos para numerosos propósitos que van desde la investigación ecológica hasta las tecnologías industriales. Una de las técnicas más comunes también se enseña en muchas clases universitarias de biología y utiliza un dispositivo llamado cámara de conteo.
Antes de que la suspensión de células pueda entrar en la cámara de recuento, es posible que necesite dilución porque podría contener miles o millones de células. En ese caso, las células no pueden contarse razonablemente. Para diluir la muestra, use una pipeta estéril para colocar diez microlitros de la solución celular en un tubo de ensayo que contenga 90 microlitros de un diluyente. El tipo de diluyente dependerá del tipo de célula. Mézclalo bien. Esta solución ahora está diez veces más diluida que la muestra inicial, por lo que su factor de dilución es 10-1. Etiquetalo. Repita esto varias veces, usando una pipeta estéril cada vez, hasta que la solución esté lo suficientemente diluida. Si lo diluyó por segunda vez, el segundo tubo de ensayo estaba 100 veces más diluido que la solución inicial, por lo que el factor de dilución fue 10-2 y así.
Es posible que deba probar varias diluciones para determinar el factor de dilución correcto para la cámara de recuento. Una cámara de conteo es básicamente una caja rectangular muy pequeña, transparente, con una profundidad precisa y una cuadrícula precisa inscrita en la parte superior. También se conoce como hemocitómetro o, a veces, hemacitómetro. El objetivo es que la suspensión esté lo suficientemente diluida como para que, cuando se vea en la cámara de recuento, no se superpongan células y se distribuyan por toda la rejilla de manera uniforme. Pipetee la suspensión diluida que contiene las células en el pocillo de la cámara de recuento, donde se asentará en la cámara de la rejilla a través de la acción capilar. Coloque la cámara de recuento en la platina del microscopio y obsérvela a baja potencia.
La cuadrícula contiene cuadrados que están hechos de cuadrados aún más pequeños. Seleccione aproximadamente cuatro o cinco cuadrados, o los que necesite para contar al menos 100 celdas, en un patrón de su elección, como las cuatro esquinas y un cuadrado central. Si las celdas son grandes, estos podrían ser los cuadrados grandes, pero si las celdas son pequeñas, puede elegir los cuadrados más pequeños en su lugar.
El volumen específico de cada cuadrícula puede variar según el fabricante de la cámara de recuento, pero a menudo, la profundidad de la cámara es de 0,1 milímetros, el área de los cuadrados grandes es 1 milímetro cuadrado y el área de los cuadrados más pequeños son 0.04 cuadrados milímetros. Los cuadrados más grandes, entonces, tienen un volumen de 0,1 milímetros cúbicos. Para este ejemplo, suponga que contó un total de 103 células en cinco cuadrados y que diluyó la muestra inicial hasta que el factor de dilución fue 10-2.
Si cada cuadrícula tiene un volumen de 0.1 milímetros cúbicos y se contaron cinco, entonces el volumen total de la cámara que se contó fue de 0.5 milímetros cúbicos y había 103 celdas. Duplicado para que sea 1 milímetro cúbico, serían 206 celdas. Un centímetro cúbico equivale a 1 mililitro, que es una medida útil para líquidos. Hay 1,000 milímetros cúbicos en un centímetro cúbico. Por lo tanto, si hubiera habido un centímetro cúbico, o un mililitro, de suspensión, habría contado 206,000 (206 x 1,000) células. Así es como se ve como una ecuación:
Volumen del cuadrado de la cuadrícula × número de cuadrados contados = volumen total de suspensión contada
Número de células ÷ volumen de suspensión contada = recuento de células por milímetros cúbicos
Recuento de células por milímetros al cubo × 1000 = recuento de células por mililitro
Deberá tener en cuenta cualquier dilución realizada para que la solución inicial sea contable bajo el microscopio. En este ejemplo, el factor de dilución es 10-2. Para calcular la concentración inicial de la solución:
Recuento de células por mililitro ÷ factor de dilución = concentración de células
Para este ejemplo, el recuento de células por mililitro es 206,000, y dividiéndolo por 10-2 (0.01) da una concentración celular de 20,600,000 células por mililitro en la muestra inicial.
