Los científicos utilizan la citometría de flujo para diferenciar entre diferentes tipos de células u organismos microscópicos. Es una herramienta que se utiliza en muchas aplicaciones como el diagnóstico médico o la patología forense. Si bien esta técnica experimental es bastante fácil de lograr, el análisis de los datos complejos produjo por el citómetro de flujo es más difícil debido a los múltiples factores experimentales y / o citómetro parámetros. Como tal, es una rutina que los datos citométricos se visualicen y analicen utilizando sofisticados programas profesionales como CELLQuest o FlowJo. Es necesario estar familiarizado con las técnicas, la maquinaria y el software de citometría de flujo para comprender los resultados producidos por estos experimentos.
Aclare el objetivo del experimento preguntando: "¿Cuál fue la pregunta o hipótesis que se estaba investigando?" Esto será necesario para ajustar los resultados brutos al formato y la configuración adecuados para un análisis posterior mediante citometría estadística software. Realice los cambios necesarios para que los datos se muestren con los ajustes relevantes (por ejemplo, células positivas, puertas negativas, intensidad de fluorescencia, poblaciones de células, etc.).
Encuentra puertas. Las celdas se pueden agrupar o simplemente observar agrupadas en un diagrama de densidad o diagrama de contorno. Los grupos a menudo se separan según su identidad. Si un grupo se tiñe muy intensamente para un marcador o anticuerpo en particular, se concluye que todos los miembros de ese grupo tienen la identidad del tipo celular específico, que expresa ese marcador. Es común encontrar células que son positivas para más de uno de estos marcadores, y estas células suelen ser intermedias y se denominan "doblemente positivas".
Mira los gráficos de dispersión. La forma en que los grupos de células se distribuyen en un diagrama de dispersión es una indicación del tamaño de las células. Las células con dispersiones muy grandes o elevadas suelen ser células grandes; sin embargo, pueden ser grandes simplemente porque contienen una alta proporción de citoplasma, o pueden ser altos porque tienen un núcleo muy grande. Dependiendo de la biología que se esté investigando, esto, por supuesto, variará ampliamente entre los experimentos.
Mira los números. Ajuste las gráficas para mostrar diferentes parámetros en un eje (generalmente el eje X) mientras mantiene los recuentos en el eje Y. Esto indica la proporción de la población de la muestra que es positiva para ese parámetro en particular, como El pico normalmente se observará en una muestra teñida positivamente, que estará ausente del control negativo. muestra.
Observe los histogramas de múltiples parámetros. Al ajustar el eje X y el eje Y para que cada uno represente un parámetro diferente que fue investigado durante el experimento, es posible obtener una comprensión más profunda de las propiedades de la muestra. Por ejemplo, al establecer el eje X en fluorescencia roja y el eje Y en fluorescencia verde, se pueden calcular compuertas de estilo cuadrante para la muestra para mostrar cuatro regiones de un cuadrante en el que las células están presentes y teñidas para fluorescencia roja o verde, ambos colores o ninguna en todas. Esto permite dividir una muestra heterogénea en sus partes componentes y visualizar y cuantificar cualquier entidad superpuesta.
Referencias
- “Análisis de datos de citometría de flujo”; Susan Sharrow; 1991
- “Citometría de flujo: instrumentación y análisis de datos”; Marvin Van Dila; 1985
- “Protocolos de citometría de flujo”; Teresa y Robert Hawley; 2004
Sobre el Autor
Palmer Owyoung tiene una Maestría en Negocios Internacionales de la Universidad de California en San Diego y una Licenciado en sociología de la Universidad de California en Santa Bárbara y es un especialista molecular capacitado. biólogo. Es escritor autónomo desde 2006. Además de escribir, es comerciante de Forex y comercializador de Internet a tiempo completo.
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