Las desventajas del Western Blot

La inmunotransferencia es uno de los procedimientos más comunes en los laboratorios bioquímicos. Básicamente, separa las proteínas de una muestra por tamaño y luego las analiza con anticuerpos para determinar si una proteína determinada está presente. Es útil no solo en investigación sino también en laboratorios médicos o de diagnóstico; las pruebas tanto para el VIH como para la enfermedad de Lyme, por ejemplo, implican una prueba de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), seguida de una transferencia Western si la prueba ELISA da positivo. Sin embargo, a pesar de su popularidad, el Western Blot tiene varias desventajas.

Las transferencias de Western clásicas no son cuantitativas. En otras palabras, si bien pueden decirles a los investigadores si una proteína en particular está presente, no permiten cuantificar la cantidad de proteína presente. Algunas empresas de biotecnología ahora venden kits que permiten a los investigadores o técnicos de laboratorio cuantificar la cantidad de proteína presente usando una curva estándar, pero esto solo funciona si se toman muestras puras de la misma proteína disponible. Además, el peso molecular de una proteína solo puede estimarse con Western blot, en lugar de determinarse con precisión como con espectrometría de masas.

Solo se puede realizar una transferencia de Western si se dispone de anticuerpos primarios contra la proteína de interés. Si bien las empresas de biotecnología ofrecen anticuerpos para muchas proteínas diferentes, no son baratos; si los anticuerpos primarios no están disponibles para una proteína determinada, no será posible realizar una transferencia de Western en busca de esa proteína en particular. Además, los investigadores pueden querer determinar si una proteína se ha modificado de alguna manera, si ha sido fosforilada (tuvo un grupo fosfato unido a él), por ejemplo, y con la técnica de Western blot necesitan anticuerpos específicos para el modificado proteína.

Puede ser un desafío realizar una transferencia Western correctamente y obtener buenos resultados, por lo que el personal debe estar bien capacitado. En esto, como en muchas otras cosas, la experiencia es quizás el mejor tutor; Sin embargo, incluso para un técnico experimentado, un Western blot requiere mucho tiempo. La parte de electroforesis en gel del experimento, por ejemplo, tardará típicamente de una a dos horas en ejecutarse. Por supuesto, se pueden realizar otras tareas mientras el gel se está ejecutando, pero el experimento aún requiere bastante tiempo para obtener resultados.

Los anticuerpos a veces pueden exhibir alguna unión fuera del objetivo, lo que puede hacer que los resultados sean peores. Además, con la transferencia Western, se usa un anticuerpo contra una proteína específica, por lo que sus resultados solo le dirán si esa proteína estaba presente. La espectrometría de masas de alta resolución, por el contrario, revela todas las proteínas presentes en una muestra y, a diferencia de la transferencia Western clásica, es cuantitativa. Es importante recordar, por supuesto, que la espectrometría de masas es mucho más cara y técnicamente más desafiante de usar en comparación con la transferencia Western.