Calcular el título de un virus es una forma complicada de decir que un científico está contando la cantidad de virus en una muestra en particular. Para calcular los títulos de virus, los científicos infectan placas de bacterias en crecimiento con soluciones virales en concentraciones variables y Calcule la cantidad de virus en la solución original contando las bacterias que han muerto debido al virus. infección.
Póngase guantes, llene 10 tubos de cultivo con 9 ml de caldo y etiquételos como "10 ^ -1", "10 ^ -2", "10 ^ -3" y así sucesivamente hasta "10 ^ -10". Estos tubos se utilizarán para diluciones seriadas virales que se utilizarán para calcular los fagos. título. Dado que los virus pueden crecer a concentraciones increíblemente altas, debe diluirlos para contarlos de manera efectiva. Cada tubo representa una dilución diez veces mayor del virus.
Tome 1 ml del cultivo mixto de su tubo etiquetado como "10 ^ -1" y transfiéralo con una pipeta nueva al siguiente tubo, etiquetado como "10 ^ -2". Mezcle este tubo también.
Continúe con este patrón para crear una serie de diluciones en serie. Terminarás con 9 tubos de 9 ml y 1 tubo de 10 ml. Las cargas virales en sus tubos se diluirán en cualquier lugar desde 10 veces (su primer tubo) o 100 veces (su segundo tubo) hasta diez mil millones de veces (su tubo final).
Agregue dos gotas de cultivo bacteriano a su agar y mezcle suavemente. Estas son las bacterias que morirán, lo que le permitirá contar la cantidad de partículas de virus en una solución en particular.
Agregue 1 ml de cada dilución en serie a su tubo de agar correspondiente mientras los tubos aún están en el baño de agua caliente. Por ejemplo, 1 ml de su dilución en serie 10 ^ -1 debe ir al tubo de agar con la etiqueta "10 ^ -1".
Mezcle cada tubo y luego vierta cada tubo en la placa de Petri con la etiqueta correspondiente. Esto creará una fina capa de agar que se ha inoculado con bacterias y virus en cada placa. Deje que las placas crezcan durante la noche en una incubadora.
Saque sus placas de la incubadora y examínelas. Debería ver áreas nubladas en toda la placa donde han crecido las bacterias, excepto por pequeños puntos claros llamados placas. Estas placas son parches de bacterias muertas y cada placa representa un virus.
Tome el número de placas en su plato y multiplíquelo por 10. Si contaras 157 placas, obtendrás 1570.
Multiplique el número que obtuvo en el paso anterior por el inverso del número en su tubo de dilución. Por ejemplo, si la placa que seleccionó fue la placa 10 ^ -5, multiplicaría 1570 por 10 ^ 5 para obtener 157000000. Este número final es su título de fagos y representa el número de virus por ml de su cultivo original.