Ventajas y desventajas de Western Blot

Western blot, una técnica analítica utilizada para identificar una proteína específica en una muestra determinada, emplea la capacidad de una enzima o un anticuerpo primario marcado con fluorescencia para unirse a su antígeno específico. Es un proceso de tres pasos que comienza con electroforesis en gel, seguido de transferencia de membrana y sondeo con anticuerpos. La detección de proteínas puede ser directa o indirecta, utilizando este último un anticuerpo secundario marcado dirigido contra el primario. Aunque se acepta como una técnica de análisis de proteínas de rutina, el western blot tiene limitaciones y beneficios.

Uno de los mayores argumentos a favor del western blot es su sensibilidad. Debido a su capacidad para detectar tan solo 0,1 nanogramos de proteína en una muestra, la técnica teóricamente puede servir como una herramienta de diagnóstico temprano eficaz, que detecta incluso la más mínima respuesta inmunogénica de un virus o bacteria en un paciente muestra. Una transferencia de Western indirecta se basa aún más en esta sensibilidad a partir de la capacidad del anticuerpo secundario para amplificar la intensidad de la señal detectada por el sistema de imágenes. Una mayor sensibilidad significa que se necesitan menos anticuerpos para las pruebas, lo que reduce significativamente los costos de laboratorio.

La técnica de western blot debe su especificidad a dos grandes factores contribuyentes. Primero, la electroforesis en gel clasifica una muestra en proteínas de diferente tamaño, carga y conformación. Este proceso en sí mismo es un gran paso hacia la detección, ya que las bandas formadas en el gel ya dan pistas sobre el tamaño de la proteína o polipéptido de interés. La especificidad de la interacción anticuerpo-antígeno sirve como el segundo gran factor. Debido a que los anticuerpos específicos muestran afinidad por proteínas específicas, el proceso puede detectar selectivamente una proteína diana incluso en una mezcla de 300.000 proteínas diferentes.

A pesar de su sensibilidad y especificidad, un western blot aún puede producir resultados erróneos. Un resultado falso positivo cuando un anticuerpo reacciona con una proteína no deseada, que es lo que con frecuencia sucede cuando un paciente que se está haciendo la prueba del VIH tiene tuberculosis o una serie de enfermedades parasitarias infecciones. Un falso negativo, por otro lado, puede resultar fácilmente si las proteínas más grandes no tienen suficiente tiempo para transferirse adecuadamente a la membrana. La transferencia y el procesamiento incorrectos a menudo producen bandas sesgadas, descoloridas o incluso múltiples, lo que hace que los resultados de las pruebas estén sujetos a la interpretación del técnico.

El costo de un western blot es una combinación de los grandes gastos individuales para anticuerpos marcados, analistas calificados y equipo de laboratorio. Un proceso delicado, el Western Blot requiere precisión en cada paso para la identificación adecuada de los componentes de una muestra. Un pequeño error en la concentración del reactivo o en el período de incubación puede ser desastroso para todo el proceso. Por último, el equipo necesario para la detección y la formación de imágenes (sistemas de detección quimioluminiscente, fluorescente, radiactiva o láser) puede ser demasiado caro para la unidad de microbiología promedio.