Tu maestro te entrega una muestra de bacterias y te pregunta: ¿Cuántos microorganismos viables hay en esta muestra? ¿Qué significa esto y cómo lo averigua? Un método es encontrar el número de unidades formadoras de colonias(UFC).
¿Qué son las UFC?
CFU se refiere al número de colonias individuales de cualquier microorganismo que crecen en una placa de medio. Este valor, a su vez, representa el número de bacterias capaces de replicarse a medida que han formado colonias en la placa. Existe una fórmula de UFC que implica el muestreo.
¿Cómo se encuentra la UFC?
Contar la cantidad de bacterias en una muestra líquida es muy difícil. Hay demasiados y son demasiado pequeños. Además, algunos de ellos pueden estar muertos y otros vivos, y los muertos no deben contarse para el total. Solo estas interesado en viable bacterias o bacterias que pueden replicarse. Entonces, ¿cómo puedes saber cuántas bacterias tienes?
De la misma manera que puede tomar una encuesta de 1,000 personas y aplicarla a 10,000 personas para averiguar cómo podrían pensar sobre un tema determinado. Puede intentar tomar una pequeña parte de su muestra original, averiguar cuántas bacterias hay en esa parte, y luego calcule para aproximar cuántos podría haber habido en el original muestra.
Uso de diluciones para encontrar UFC
El procedimiento para encontrar UFC de una muestra dada implica primero diluir esa muestra. A continuación, las diluciones se siembran en placas con el medio de crecimiento correcto. Las diluciones múltiples suelen ser una buena idea, ya que la muestra original puede estar muy concentrada.
Después de permitir que las bacterias crezcan en las placas durante un tiempo determinado, colonias individuales se cuentan en un plato. Si la muestra estaba demasiado concentrada, en lugar de colonias individuales, verá un área grande cubierta con crecimiento bacteriano que se llama césped. Esto significa que debe diluir aún más su muestra e intentar crecer nuevamente para que pueda ver colonias individuales.
Como las colonias individuales provienen de una sola bacteria que se replicó muchas veces, solo estas cuentan para la UFC.
Procedimiento experimental para encontrar UFC
Un ejemplo de cómo usar diluciones para hacer un cálculo de UFC podría ser el siguiente: Primero, de la muestra inicial que te da tu maestro, tomas 1 ml y lo colocas en un plato. Al día siguiente ves que hay un césped de bacterias. Esto significa que no puede contar el número de UFC. El siguiente paso es hacer algunas diluciones.
Primero, toma 1 mL de muestra y lo diluye en 9 mL de medio líquido. Dado que la dilución es una parte de muestra por nueve partes de diluyente, se denomina dilución 1:10. Luego, toma 1 ml de la dilución 1:10 y lo agrega a 9 ml de medio líquido. Esta dilución es una dilución de 1: 100. Por último, haga una dilución 1: 1,000 tomando 1 ml de la dilución 1: 100 y agregando 9 ml de medio líquido. Para cada dilución, ahora tiene 10 ml de cultivo bacteriano diluido.
Diluciones hechas, coloque 0.5 mL de las diluciones en placas. Asegúrese de etiquetar las placas con las que se colocó la dilución.
Al día siguiente, regresa y ve que todas las placas tienen algunas colonias individuales. Quieres elegir un plato entre 30 y 300 colonias. Verá que la placa de dilución 1: 1,000 tiene aproximadamente 10 colonias, lo que significa que diluyó demasiado la muestra. Esa placa no será útil para encontrar CFU.
La placa de dilución 1:10 tiene muchas colonias, quizás más de 300. En ese caso, puede pasar al plato 1: 100. Cuenta las colonias en esta placa y encuentra que tiene 179 colonias. Esto significa que 0,5 ml de la dilución 1: 100 contienen 179 UFC. Pero, ¿qué pasa con la muestra original?
¿Qué es el cálculo de CFU?
Ahora que tiene algunos datos, puede hacer el cálculo de CFU en la muestra original.
1. Tome la cantidad que colocó en la placa (0,5 ml) y multiplique por el factor de dilución (0,01) para obtener 0,005. Debe hacer esto para encontrar el factor de dilución que produjo su recuento de UFC. Aquí, medio mililitro de la dilución 1: 100 le permitió contar CFU.
2. Divida la UFC de la dilución (179) por el resultado del Paso 1 (0,005) para obtener 35.800 UFC.
Esto significa que el 1 mL original de muestra que se diluyó contiene 35,800 UFC. Otra forma de decirlo es decir que la muestra original tiene 35,800 UFC / mL.
CFU es una gran herramienta para encontrar cuántas bacterias, hongos o microorganismos hay en una muestra determinada. El método de enchapado que se describe aquí es particularmente útil para muestras u organismos muy concentrados que no crecen bien en cultivo líquido.