Οι χημικοί χρησιμοποιούν υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης ή HPLC για να διαχωρίσουν μίγματα ενώσεων. Γενικά, η μέθοδος συνίσταται στην έγχυση ενός δείγματος σε μια στήλη όπου αναμιγνύεται με έναν ή περισσότερους διαλύτες. Διαφορετικές ενώσεις προσροφώνται ή "κολλάνε" στη στήλη σε διαφορετικούς βαθμούς. και καθώς ο διαλύτης ωθεί τις ενώσεις μέσω της στήλης, ένα από τα συστατικά του μίγματος θα βγει πρώτα από τη στήλη. Το όργανο ανιχνεύει τις ενώσεις καθώς εξέρχονται από τη στήλη και παράγει ένα χρωματογράφημα που αποτελείται από μια γραφική παράσταση με χρόνο συγκράτησης στον άξονα Χ και ένταση σήματος από τον ανιχνευτή στον άξονα γ. Καθώς οι ενώσεις εξέρχονται από τη στήλη, παράγουν «κορυφές» στο χρωματογράφημα. Γενικά, όσο πιο μακριά είναι και όσο πιο στενές είναι οι κορυφές στο χρωματογράφημα, τόσο υψηλότερη είναι η ανάλυση. Οι επιστήμονες θεωρούν ότι μια ανάλυση 1,0 ή υψηλότερη αντιπροσωπεύει επαρκή διαχωρισμό.
Μετρήστε τα πλάτη δύο γειτονικών κορυφών στο χρωματογράφημα σημειώνοντας πού βρίσκονται οι τιμές του άξονα Χ στη βάση κάθε κορυφής. Ο άξονας x αντιπροσωπεύει το χρόνο συγκράτησης, συνήθως μετριέται σε δευτερόλεπτα. Έτσι, εάν η κορυφή ξεκινά στα 15,1 δευτερόλεπτα και τελειώνει στα 18,5 δευτερόλεπτα, το πλάτος της είναι (18,5 - 15,1) = 3,4 δευτερόλεπτα.
Προσδιορίστε τους χρόνους συγκράτησης σημειώνοντας το χρόνο, δηλαδή, τη θέση στον άξονα-x, που αντιστοιχεί στις θέσεις των μέγιστων των κορυφών. Αυτή η τιμή θα είναι κανονικά περίπου στα μισά μεταξύ των δύο τιμών που χρησιμοποιούνται για τον υπολογισμό του πλάτους στο βήμα 1. Το παράδειγμα που δίνεται στο βήμα 1, για παράδειγμα, θα εμφανίζει ένα μέγιστο στα περίπου 16,8 δευτερόλεπτα.
Υπολογίστε την ανάλυση, R, μεταξύ δύο κορυφών με:
R = \ frac {RT_1-RT_2} {0,5 (W_1 + W_2)}
όπου RT1 και RT2 αντιπροσωπεύουν τους χρόνους συγκράτησης των κορυφών 1 και 2 και W1 και W2 αντιπροσωπεύουν τα πλάτη των κορυφών που λαμβάνονται στις βάσεις τους. Συνεχίζοντας το παράδειγμα από τα βήματα 2 και 3, μια κορυφή εμφανίζει χρόνο κατακράτησης 16,8 δευτερολέπτων και πλάτος 3,4 δευτερολέπτων. Εάν η δεύτερη κορυφή παρουσίασε χρόνο διατήρησης 21,4 δευτερολέπτων με πλάτος 3,6 δευτερολέπτων, τότε η ανάλυση θα ήταν:
R = \ frac {21.4-16.8} {0,5 (3,4 + 3,6)} = 1,3
Πράγματα που θα χρειαστείτε
- Χρωματογράφημα HPLC
- Αριθμομηχανή