Πώς να υπολογίσετε τη συγκέντρωση κυττάρων

Οι επιστήμονες και οι τεχνικοί συχνά πρέπει να υπολογίζουν τη συγκέντρωση των κυττάρων σε ένα εναιώρημα. Για παράδειγμα, όταν ένας ασθενής τραβάει το αίμα του στο ιατρείο, το εργαστήριο μπορεί να χρησιμοποιήσει ορισμένες μεθόδους για να αναζητήσει την ποσότητα των λευκών αιμοσφαιρίων σε έναν δεδομένο όγκο αίματος. Αυτό δίνει στον γιατρό πολλές πληροφορίες σχετικά με την υγεία για τον ασθενή της, ειδικά το ανοσοποιητικό του σύστημα και αν καταπολεμά μια λοίμωξη ή άλλη ασθένεια. Δοκιμές όπως αυτό μπορούν να αναζητήσουν πολλά άλλα κύτταρα στο αίμα, καθώς και το νωτιαίο υγρό και άλλα σωματικά υγρά, όπως ο αριθμός των σπερματοζωαρίων στο σπέρμα για λόγους γονιμότητας. Οι επιστήμονες υπολογίζουν επίσης τις κυτταρικές συγκεντρώσεις βακτηρίων, ζυμομυκήτων και άλλων μικροοργανισμών για πολλούς σκοπούς, από οικολογική έρευνα έως βιομηχανικές τεχνολογίες. Μία από τις πιο κοινές τεχνικές διδάσκεται επίσης σε πολλά μαθήματα βιολογίας του κολεγίου και χρησιμοποιεί μια συσκευή που ονομάζεται θάλαμος μέτρησης.

Προτού μπορέσει το εναιώρημα κυττάρων να εισέλθει στον θάλαμο μέτρησης, μπορεί να χρειαστεί αραίωση επειδή μπορεί να περιέχει χιλιάδες ή εκατομμύρια κύτταρα. Σε αυτήν την περίπτωση, τα κελιά δεν μπορούν λογικά να μετρηθούν. Για να αραιώσετε το δείγμα, χρησιμοποιήστε μια αποστειρωμένη πιπέτα για να τοποθετήσετε δέκα μικρολίτρα του κυτταρικού διαλύματος σε δοκιμαστικό σωλήνα που περιέχει 90 μικρολίτρα αραιωτικού. Ο τύπος του αραιωτικού εξαρτάται από τον τύπο του κυττάρου. Ανακατέψτε καλά. Αυτή η λύση είναι τώρα δέκα φορές πιο αραιωμένη από το αρχικό δείγμα, οπότε ο συντελεστής αραίωσης είναι 10-1. Επισημάνετε το. Επαναλάβετε αυτό αρκετές φορές, χρησιμοποιώντας μια αποστειρωμένη πιπέτα κάθε φορά, έως ότου το διάλυμα αραιωθεί αρκετά. Εάν το αραιώσατε για δεύτερη φορά, ο δεύτερος δοκιμαστικός σωλήνας ήταν 100 φορές πιο αραιωμένος από το αρχικό διάλυμα, οπότε ο συντελεστής αραίωσης ήταν 10-2 και ούτω καθεξής.

Ίσως χρειαστεί να δοκιμάσετε αρκετές αραιώσεις για να προσδιορίσετε τον σωστό παράγοντα αραίωσης για τον θάλαμο μέτρησης. Ένας θάλαμος μέτρησης είναι βασικά ένα πολύ μικρό, διαυγές, ορθογώνιο κουτί με ακριβές βάθος και ακριβές πλέγμα εγγεγραμμένο στην κορυφή. Είναι επίσης γνωστό ως αιμοκυτταρόμετρο ή μερικές φορές αιμοκυτταρόμετρο. Ο στόχος είναι το εναιώρημα να είναι αρκετά αραιωμένο ώστε όταν βλέπει στον θάλαμο μέτρησης, να μην επικαλύπτονται κελιά και να κατανέμονται σε όλο το πλέγμα με ομοιόμορφο τρόπο. Πιέστε με πιπέτα το αραιωμένο εναιώρημα που περιέχει τα κύτταρα μέσα στο φρεάτιο στον θάλαμο μέτρησης, όπου θα κατακαθίσει στον θάλαμο πλέγματος μέσω τριχοειδούς δράσης. Τοποθετήστε τον θάλαμο μέτρησης στη σκηνή του μικροσκοπίου και δείτε τον με χαμηλή ισχύ.

Το πλέγμα περιέχει τετράγωνα που αποτελούνται από ακόμη μικρότερα τετράγωνα. Επιλέξτε περίπου τέσσερα ή πέντε τετράγωνα, ή όσα πολλά πρέπει να μετρήσετε τουλάχιστον 100 κελιά, σε ένα μοτίβο της επιλογής σας, όπως οι τέσσερις γωνίες και ένα κεντρικό τετράγωνο. Εάν τα κελιά είναι μεγάλα, αυτά θα μπορούσαν να είναι τα μεγάλα τετράγωνα, αλλά αν τα κελιά είναι μικρά, μπορείτε να επιλέξετε τα μικρότερα τετράγωνα.

Ο ειδικός όγκος κάθε τετραγώνου πλέγματος μπορεί να ποικίλει μετρώντας τον κατασκευαστή του θαλάμου, αλλά συχνά, το βάθος του θαλάμου είναι 0,1 χιλιοστά, η επιφάνεια των μεγάλων τετραγώνων είναι 1 τετραγωνικό χιλιοστόμετρο, και η περιοχή των μικρότερων τετραγώνων είναι 0,04 τετραγωνικά χιλιοστά. Τα μεγαλύτερα τετράγωνα, τότε, έχουν όγκο 0,1 κυβικά χιλιοστά. Για αυτό το παράδειγμα, υποθέστε ότι μετρήσατε συνολικά 103 κελιά σε πέντε τετράγωνα και ότι αραιώσατε το αρχικό δείγμα έως ότου ο συντελεστής αραίωσης ήταν 10-2.

Εάν κάθε τετράγωνο πλέγματος έχει όγκο 0,1 κυβικά χιλιοστά και πέντε μετρήθηκαν, τότε ο συνολικός όγκος του θαλάμου που μετρήθηκε ήταν 0,5 κυβικά χιλιοστά και υπήρχαν 103 κύτταρα. Διπλασιασμένος για να γίνει 1 κυβικό χιλιοστό θα το έκανε 206 κύτταρα. Ένα κυβικό εκατοστό είναι ισοδύναμο με 1 χιλιοστόλιτρο, το οποίο είναι μια χρήσιμη μέτρηση για υγρά. Υπάρχουν 1.000 κυβικά χιλιοστά σε κυβικό εκατοστό. Επομένως, εάν υπήρχε ένα κυβικό εκατοστό ή ένα χιλιοστόλιτρο εναιώρησης, θα είχατε μετρήσει 206.000 (206 x 1.000) κελιά. Αυτό μοιάζει με εξίσωση:

Όγκος τετραγώνου πλέγματος × αριθμός τετραγώνων που μετρήθηκαν = συνολικός όγκος της μετρημένης ανάρτησης

Αριθμός κελιών ÷ όγκος καταμετρημένου εναιωρήματος = αριθμός κυψελών ανά χιλιοστόμετρο σε κύβους

Αριθμός κυττάρων ανά χιλιοστόμετρο σε κύβους × 1000 = αριθμός κυττάρων ανά χιλιοστόλιτρο

Θα πρέπει να λάβετε υπόψη οποιαδήποτε αραίωση που πραγματοποιήθηκε για να καταστήσετε το αρχικό διάλυμα μετρήσιμο στο μικροσκόπιο. Σε αυτό το παράδειγμα, ο συντελεστής αραίωσης είναι 10-2. Για τον υπολογισμό της αρχικής συγκέντρωσης του διαλύματος:

Αριθμός κυττάρων ανά χιλιοστόλιτρο ÷ συντελεστής αραίωσης = Συγκέντρωση κυττάρου

Για αυτό το παράδειγμα, ο αριθμός κυττάρων ανά χιλιοστόλιτρο είναι 206.000 και διαιρώντας τον με το 10-2 (0,01) δίνει μια συγκέντρωση κυττάρων 20.600.000 κύτταρα ανά χιλιοστόλιτρο στο αρχικό δείγμα.

  • Μερίδιο
instagram viewer