Τεχνικές απομόνωσης για ένα ραβδωτό πιάτο

Αν και δεν είναι ορατά με γυμνό μάτι, τα βακτήρια είναι παντού. Υπάρχουν σε τρόφιμα, χώμα, νερό, επιφάνειες μέσα στα σπίτια μας και μέσα και πάνω στο σώμα μας. Τα βακτήρια γενικά υπάρχουν σε μικτούς πληθυσμούς. Η απομόνωση ενός συγκεκριμένου βακτηρίου από άλλα βακτηριακά είδη σε ένα δεδομένο δείγμα επιτρέπει στους μικροβιολόγους να μελετήσουν τη δομή και τη λειτουργία του, χαρακτηριστικά που χρησιμοποιούνται στην ταυτοποίησή του. Οι μικροβιολόγοι απομονώνουν συχνά βακτήρια χρησιμοποιώντας μία από τις πολλές τεχνικές πλάκας ράβδου.

Ένας βρόχος εμβολιασμού χρησιμοποιείται για τη μεταφορά μικροοργανισμών. Αποτελείται από σύρμα νικελίου ή πλατίνας με ένα μικρό, κυκλικό βρόχο στο ένα άκρο. Το άλλο άκρο είναι ίσιο και ολισθαίνει σε μια λαβή. Διατίθενται επίσης πλαστικοί βρόχοι εμβολιασμού μίας χρήσης. Τα βακτήρια μπορούν να απομονωθούν μόνο εάν αναπτυχθούν. Οι μικροβιολόγοι αναπτύσσουν βακτήρια για απομόνωση ραβδώσεων σε ρηχά, στρογγυλά τρυβλία Petri γεμάτα με ένα στερεό μέσο, ​​που ονομάζεται άγαρ. Το Agar μιμείται το περιβάλλον στο οποίο αναπτύσσονται φυσικά τα βακτήρια. Τα πιάτα γεμάτα με μέσα είναι αποστειρωμένα και καλύπτονται για να αποτρέψουν την ανάπτυξη ανεπιθύμητων οργανισμών. Κατά τη διάρκεια της απομόνωσης πλάκας ραβδώσεων, ο βρόχος εμβολιασμού αποστειρώνεται επανειλημμένα στη φλόγα ενός καυστήρα Bunsen.

Η τεχνική ραβδώσεων είναι η πιο δημοφιλής μέθοδος για την απομόνωση συγκεκριμένων βακτηρίων από ένα δείγμα που περιέχει ένα μείγμα μικροοργανισμών. Η τεχνική ουσιαστικά αραιώνει τον αριθμό των οργανισμών και μειώνει την πυκνότητά τους. Επιτρέπει στους μικροβιολόγους να διακρίνουν και να απομονώσουν μεμονωμένες βακτηριακές αποικίες. Μια αποικία είναι ένα ορατό σύμπλεγμα βακτηρίων. Όλα τα βακτήρια σε μία αποικία προέρχονται από το ίδιο βακτηριακό κύτταρο. Κατά συνέπεια, οι μεμονωμένες αποικίες είναι «καθαρές» αποικίες. Η καθαρή αποικία μεταφέρεται σε άλλη πλάκα για την παραγωγή καθαρής καλλιέργειας που αποτελείται από έναν τύπο βακτηρίων.

Όταν γίνει σωστά, η απομόνωση ραβδωτών πλακών αραιώνει ένα δείγμα και επιτρέπει σε μεμονωμένα βακτηριακά κύτταρα να εξελιχθούν σε απομονωμένες αποικίες. Ένας μικροβιολόγος ξεκινά αποστειρώνοντας τον βρόχο εμβολιασμού σε μια φλόγα. Ψύχει τον βρόχο αγγίζοντας τον στο άγαρ, έπειτα βυθίζει τον βρόχο στο δείγμα και τον απλώνει μπρος-πίσω για να καλύψει ένα τμήμα της πλάκας. Αποστειρώνει τον βρόχο, τον ψύχει και εμβολιάζει ένα δεύτερο, παρακείμενο τμήμα της πλάκας σύροντας το βρόχο μέσω του πρώτου τμήματος αρκετές φορές και καλύπτοντας το δεύτερο τμήμα χρησιμοποιώντας ζιγκ-ζαγκ κίνηση. Αυτό παίρνει ένα μικρό αριθμό βακτηρίων από το πρώτο τμήμα και τα μεταφέρει στο δεύτερο τμήμα. Ο αριθμός των επαναλήψεων αυτής της βασικής διαδικασίας εξαρτάται από τη χρησιμοποιούμενη μέθοδο πλάκας ράβδου. Παρά τη μέθοδο, το αρχικό δείγμα χρησιμοποιείται μόνο για τον εμβολιασμό του πρώτου τμήματος της πλάκας.

Οι μέθοδοι πλάκας ράβδου ποικίλλουν ανάλογα με τον αριθμό τμημάτων άγαρ. Η μέθοδος T-streak χρησιμοποιεί τρία τμήματα: το άνω μισό και δύο τμήματα κάτω ίσου μεγέθους. Το αρχικό εμβόλιο τοποθετείται στο πάνω μισό της πλάκας. Τα βακτήρια σύρονται από το επάνω τμήμα σε ένα από τα κάτω τμήματα και μετά από το κάτω τμήμα στο άλλο. Στη μέθοδο τεταρτημορίου, τέσσερα τμήματα ίσου μεγέθους είναι ραβδωτά. Η μέθοδος συνεχούς ραβδώσεως περιλαμβάνει συνήθως τον εμβολιασμό του άνω μισού της πλάκας, περιστρέφοντάς την κατά 180 μοίρες, και εμβολιάστε το άλλο μισό της πλάκας χωρίς να αποστειρώσετε τον βρόχο ή να σύρετε βακτήρια από το προηγούμενο Ενότητα.